样本要求：
1、用肝素抗凝采血管采集200uL以上样本。
2、样本要存放于室温且避免震摇，血液采集后24小时内使用。
3、样品染色后避光保存于2-8℃，24小时内上机检测。
4、样本如有微生物污染、脂血、凝血及细胞活力不佳，则应避免使用，除非样本具有不可替代性，请在结果报告时标注。

需自备的材料：
1、血细胞分析用溶血剂
2、流式抗体试剂
3、肝素抗凝采血管
4、量程范围适用于20uL、100uL、1mL的移液器及一次性吸头
5、涡旋振荡器
6、流式细胞仪

操作步骤：
1、采用反向移液技术吸取50uL混匀的样本，加入绝对计数管底部，移液器前端避免接触管底，避免血液碰到管壁上部。
2、在流式管底部加入一定量的流式抗体试剂。
3、盖上管帽，轻轻涡动混匀约3秒钟，室温避光反应25分钟。
4、向管内加入450uL血细胞分析用溶血剂，盖上管帽，轻轻涡动混匀约15秒钟，室温避光反应10分钟。免洗，待检。
5、轻轻涡动混匀约10秒钟，上机检测。
下面以正常成人外周血样本、CD3-FITC/ CD8-PE/ CD45-PerCP / CD4-APC荧光单克隆抗体试剂盒（流式细胞仪法）为例示范分析方法。
首先，建立CD45/SSC散点图，淋巴细胞群显示为CD45高表达，SSC低表达，用不规则门圈出，见图1：

图1：CD45/SSC散点图中圈出淋巴细胞门

其次，选择显示淋巴细胞门内细胞，设置CD3/SSC散点图。圈出CD3+，见图2。

图2：CD3/SSC散点图中圈出CD3+淋巴细胞

选择显示淋巴细胞门内细胞，设置CD3/CD4散点图四象限门。CD3、CD4双阳细胞即为CD4+T淋巴细胞，见图3。

图3：CD3/CD4散点图设置四象限门

最后，选择显示全部细胞，设置CD3/CD8散点图，圈出绝对计数微球，见图4。

图4：CD3/CD8散点图圈出绝对计数微球

如果未使用绝对计数的自动软件，可用以下方程式人工计数：
淋巴亚群绝对数(cells/uL)=（区域内淋巴亚群细胞数×微球标示值）/（区域内绝对计数微球数×样本体积）

流式绝对计数微球