【FACSCelesta实验应用系列】之12色T细胞亚群的免疫分型

本文摘自微信公众号：BD生物科学

【实验概述】

本实验采用FACSCelesta 12色方案对人外周血白细胞中T细胞亚群进行更进一步的细分，实现了一管即清楚区分十几个不同亚群，其中不乏极其稀有的群体，充分体现出FACSCelesta的高灵敏度和高分辨率，同时也用实际实验证明了BV及BUV染料不仅是多色试验必选染料，更是检测稀有细胞和弱表达抗原的利器。

【实验方法】

①/ 仪器配置

Flow cytometer	Laser
FACSCelesta	488nm Blue Laser 405nm Violet Laser 355nm UV Laser

②/ 多色配色方案及流式试剂

● 配色方案

BB515	PE	PE-CF594	PerCP-Cy5.5	BV421	BV510	BV605	BV650	BV711	BUV395	BUV737
CD45RO	HLA-DR	CD25	CD3	CD197	CD28	CD8	CD27	CD95	CD4	CD45RA

● 流式试剂

Products Name	Catalog No.	Clone	Size
BD Horizon™ BB515 Mouse Anti-Human CD45RO	564529	UCHL1	100T
BD Pharmingen™ PE Mouse Anti-Human HLA-DR	555812	G46-6	100T
BD Horizon™ PE-CF594 Mouse Anti-Human CD25	562403	M-A251	100T
BD Pharmingen™ PerCP-Cy™5.5 Mouse Anti-Human CD3	560835	UCHT1	50T
BD Horizon™ BV421 Mouse Anti-Human CD197 (CCR7)	562555	150503	50T
BD Horizon™ BV510 Mouse Anti-Human CD28	563075	CD28.2	50T
BD Horizon™ BV605 Mouse Anti-Human CD8	564116	SK1	100T
BD Pharmingen™ PerCP-Cy™5.5 Mouse Anti-Human CD45	564105	HI30	100T
BD Horizon™ BB515 Mouse Anti-Human CD28	564492	CD28.2	100T
BD Horizon™ BV786 Mouse Anti-Human CD27	563327	L128	100T
BD Horizon™ BV711 Mouse Anti-Human CD95	563132	DX2	50T
BD Horizon™ BUV395 Mouse Anti-Human CD4	563550	SK3	100T
BD Horizon™ BUV737 Mouse Anti-Human CD45RA	564442	HI100	50T
BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer (10x )	555899		100ml

【实验结果】

12色方案中采用了8个BV染料和BUV染料，这两种染料具有亮度高、信噪比好，且与其他染料之间的补偿少的特点，为多色实验中检测极弱表达稀有细胞群体提供了染料基础，配合高检测灵敏度和高分辨率的FACSCelesta，即使十万分之一的极其稀有细胞也可以清楚区分。而BUV染料的出现，也让355nmUV激光的应用范围更广。

* 本资料仅限科研用途使用

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