Luminex 究竟有多实用
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Luminex 究竟有多实用?实战案例告诉你!--R&D systems
定量检测 80 个样品的 50 种目标因子,ELISA 检测需要 50 个 96 孔板,按照大部分 R&D Systems ELISA 试剂盒 4.5 小时的操作,需要 225 个小时。计算完,我的内心是崩溃的。
直到我了解到一个新技能——Luminex 液相抗体芯片技术,只需要 1 块 96 孔板几个小时即可实现。
Luminex
「金标准 ELISA」的延伸
Luminex 液相抗体芯片技术以 R&D Systems 作为行业金标准的 ELISA 技术和成熟的 Luminex xMAP® 技术完美结合,一个孔可同时检测多达 100 种分析物,利用 96 孔板作为反应板,实现高通量的蛋白精确定量。
Fig. 1 Luminex 液相抗体芯片实验原理图
Luminex 检测原理为:将能识别不同目标分析物的微珠混合后与待检样本孵育,微珠捕获到分析物后,经由多个生物素标记的特异性检测抗体混合物识别,再与链霉亲和素-PE 荧光素结合后进行检测,PE 荧光的强度用以定量。
R&D Systems Luminex 采用与 ELISA 质量一致的抗体对筛选和缓冲液体系优化,在「金标准 ELISA」的基础上,提供最高标准和最优性能的 Luminex 多重检测试剂。
实战案例
揭示抗药机理
慢性髓细胞白血病(CML)是一种影响血液及骨髓的恶性肿瘤,伊马替尼化学疗法是治疗该疾病的最佳方式,然而约有 20% 的病人对此药物无效。Cancer Research 一文解开这一抗药性机理[1]。
研究表明,IL-33 刺激后,采用 R&D Systems Luminex 检测伊马替尼耐受 CML 病人组(CML-CP)及健康组(HD)CD34+ 细胞中 GM-CSF、IL-6、IL-8 三种细胞因子分泌,显示 IL-33 促使 CML-CP 组细胞因子分泌更高。
Fig.2 CML-CP 受 IL-33 刺激,细胞因子表达量增高
IL-33 和伊马替尼刺激后,IL-33 能够中和伊马替尼引起的细胞因子 GM-CSF、IL-6 分泌的降低。
Fig.3 IL-33 中和伊马替尼的抑制效应
IL-33 刺激后,Luminex 检测 9 种磷酸化蛋白表达,STAT5 分泌更高。
Fig.4 IL-33 促进 STAT5 表达增高
研究揭示了 IL-33 促进 CML 病人 CD34+ 细胞增殖和细胞因子分泌,是伊马替尼药物耐受的重要原因,它会激活 STAT5 信号通路,促进细胞增殖,因而有可能成为新的 CML 治疗靶标。
实战案例
揭示败血症感染机制
败血症是由于细菌感染,引起全身系统性炎症,导致感染性休克和器官衰竭的严重综合征,并且具有高死亡率。由革兰氏阳性细菌病原体引起的败血症目前分子机理并不明晰。
德国蒂宾根大学和美国国立卫生院(NIH)的一项研究表明[2],酚可溶性调节肽 PSM 可使处在细菌细胞膜上的脂蛋白释放,激活免疫细胞上的 TLR2,进而促进炎症因子的释放(Fig.5)。揭示除 TLR2 外,PSM 可作为新的败血症药物靶点,通过阻断 PSM 的释放,调节脂蛋白与 TLR2 的结合,进行免疫干预。
Fig.5 败血症中 PSMs 释放脂蛋白
研究中,采用 R&D Systems 公司 Luminex 试剂盒检测若干种不同菌株中炎症因子 IL-8,IL-1β,IL-6 和 TNFα的表达,最终揭示上下游因子间的互作关系,阐明新型药物靶点。
除上文提到的 Luminex 液相抗体芯片检测外,多因子检测家族还有固相抗体芯片技术。多因子——单因子或单因子——多因子的转换基于不同的设计思路及研究策略,多因子检测与单因子验证是一个相辅相成的过程,R&D Systems 具有助力此类研究的整套工具。
参考文献:
[1] Levescot A., et al. BCR-ABL-induced deregulation of the IL-33/ST2 pathway in CD34+ progenitors from chronic myeloid leukemia patients. Cancer Res. 2014 May 15;74(10):2669-76.
[2] Dennis H., et al. Toll-like receptor 2 activation depends on lipopeptide shedding by bacterial surfactants. Nature Communication, 2016, 7: 12304.
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