脱落细胞单细胞悬液的制备

时间：2018-05-25 07:00:15

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在临床工作中，可以收集到大量自然脱落细胞，这些细胞标本经过简单处理，便可成为较好的单细胞悬液供流式细胞术分析。主要包括脱落细胞、胸腹水细胞、尿液、内镜刷检细胞等。

（一）食管拉网细胞的单细胞悬液的制备

1．将食管拉网器上的细胞洗脱到20ml PBS液中，以1500r/min离心后，再用PBS液洗2次，离心500~800r/min，1~2min，弃上清；

2．再加入PBS液5ml，以300目尼龙滤网过滤，离心沉淀去上清；

3．加少许PBS液混匀沉淀细胞，加固定液或低温保存，备用。

（二）尿液脱落细胞的单细胞悬液的制备

1．用以清洁器皿收集24h尿液，置4℃冰箱中自然沉淀2h，轻轻倒去上清液，留下少许带细胞的沉淀物，用吸管移至10~20ml离心管中；

2．500r/min离心10min，去上清；

3．加PBS液8~10ml，以1000r/min离心10min，去上清，重复再洗1次；

4．再加5ml PBS液混匀，用300目尼龙滤网过滤，离心沉淀去上清；

5．再加少许PBS液，混匀。加固定液或低温保存，备用。

（三）胸、腹水脱落细胞的制备

1．抽取胸、腹水50~100ml，加入1000U/ml肝素液1ml，放盐水瓶中置于4℃冰箱中静置6~12h，弃去上清；

2．将底部10~20ml用长吸管移入试管中，用PBS液洗3次，以1500r/min离心沉淀5min；

3．再加5ml PBS液混匀，用300目尼龙滤网过滤，离心沉淀去上清；

4．加少许PBS液，混匀；加固定液或低温保存，备用。

（四）冲洗液细胞样品的制备

1．用300~500ml生理盐水冲洗膀胱，冲洗一定时间后，吸出冲洗液放入容器中于冰箱内置6~12h；

2．取沉淀液20~40ml，离心沉淀并以生理盐水洗2次，吸上清；

3．加10ml PBS液，混匀，以300目尼龙滤网过滤，离心沉淀去上清；

4．过滤后1000r/min，10min，离心沉淀，去上清；加固定液或低温保存备用。

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