凝胶过滤填料介绍

大家好，我是ӒKTA的小Ӓ，这周又和大家见面啦。之前我们一起了解了凝胶过滤层析的基本原理，今天让我来给大家介绍一下凝胶过滤的填料吧~

凝胶过滤层析（很多人喜欢叫做分子筛）是根据样品的分子大小对样品进行分离的一种简单温和的层析技术。凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析，是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。

凝胶过滤填料

凝胶过滤填料的组成

维持高分辨率的同时获得高流速的需求推动了凝胶过滤填料的发展。当样品流经凝胶过滤层析柱时，不同组分的分辨率受到多个参数的影响：流速，颗粒大小，颗粒大小的分别，装柱密度，颗粒孔隙度和粘性等。试图优化每个参数的努力促进了一系列凝胶过滤填料的研发。

最早的凝胶过滤填料通过交联多聚体三维网状结构，例如，Sephadex通过交联葡聚糖产生。控制交联程度和颗粒大小，是填料可以具有广泛的分离范围，并且每一个填料都可以在窄的分子量范围内具有高选择性。

然而，为了增加分离的速度，填料必须经受住更高的流速，因此，其它的多聚体如琼脂糖被引入。这就导致凝胶过滤基于Sepharose，后来，更高交联程度的Superose。

当能够通过移植第二个聚合体到预制的填料制备合成凝胶时。凝胶过滤的主要优势得以体现，例如，Sephacryl（将烯丙基葡聚糖和N,N-methylene bisacrylamide进行交联）和最近的Superdex。以Superdex为例，将葡聚糖链共价结合到高交联的琼脂糖填料，使其不但具有与Sephadex相似的高选择性，也具有基于高度交联琼脂糖填料的机械强度。

1、Superdex：高分辨率，省时和高回收率的首选

从实验室到生产规模应用，Superdex是高分辨率，短运行时间，高回收率的首要选择。Superdex的成功已被成百上千的科学文献清楚的证实。Superdex是基于已经共价结合了葡聚糖的高交联多孔琼脂糖颗粒的合成填料。高交联的琼脂糖填料提供了高物理和化学稳定性，葡聚糖链提供了良好的凝胶过滤特性。这种稳定性也使得Superdex制备级非常适合于工业过程中的使用，具有高流速，快速和高效的在位清洗的良好性能。

化学稳定性：

Superdex在所有常用的液体缓冲液中保持稳定，PH 3-12，以及添加剂如去污剂（1%SDS），变性剂（8M尿素或6M盐酸胍啶）。

储存：

没有使用的填料保存在4-25摄氏度20%乙醇中，不要冰冻。对于长期储存，使用4倍体积的蒸馏水清洗后，接着使用4倍体积的20%的乙醇清洗。储存在4-25摄氏度。

2、Sephacryl：实验室和工业规模的快速，高回收率分离

Sephacryl高分辨率填料为Superdex制备级需要稍微扩大组分收集范围的应用提供了有用的替代品。高化学稳定性和高流速耐受性使Sephacryl非常适合工业使用。

Sephacryl高分辨率是一种合成填料，是由烯丙基葡聚糖与N,N-甲叉二丙烯酰胺共价交联形成高机械强度的疏水性填料。通过控制葡聚糖的组成比例，填料的孔洞不同，产生不同分离特性的产品。

化学稳定性：

Sephacryl在所有常用的液体缓冲液中保持稳定，PH 3-11，以及添加剂如去污剂（1%SDS），变性剂（8M尿素或6M盐酸胍啶）。

储存：

没有使用的填料保存在4-25摄氏度20%乙醇中，不要冰冻。对于长期储存，使用4倍体积的蒸馏水清洗后，接着使用4倍体积的20%的乙醇清洗。储存在4-25摄氏度。

3、Superose：广泛的分离范围

Superose是基于高交联的多孔琼脂糖的填料，具有高物理和化学稳定性。Superose的机械强度甚至允许在实际流速中使用相对粘稠的洗脱剂，如8M尿素。在常规的条件下，当使用离子强度在0.15M到1.5M范围的缓冲液时，蛋白和Superose之间的非特异相互作用可以忽略不计。

化学稳定性：

在所有常用的液体缓冲液中保持稳定，PH 3-12，以及添加剂如去污剂（1%SDS），变性剂（8M尿素或6M盐酸胍啶），以及30%的乙腈。

储存：

没有使用的填料保存在4-25摄氏度20%乙醇中，不要冰冻。对于长期储存，使用4倍体积的蒸馏水清洗后，接着使用4倍体积的20%的乙醇清洗。储存在4-25摄氏度。

4、Sephadex：高或低分子量物质的快速组群分离，如除盐、缓冲液置换和样品净化

Sephadex是由环氧丙烷和葡聚糖交联而制备的。Sephadex由于交联程度的不同而有不同的种类。

文献中经常提到透析是除盐和置换缓冲液的有效技术。然而，透析技术通常非常缓慢，需要大体积的缓冲液。在处理过程中，由于蛋白裂解的作用，或者与透析膜的非特异性结合，都可能造成样品的损失。使用Sephadex G-25脱盐柱是一种更加简单和快速的脱盐技术，可以用来实现高分子量和低分子量物质的组群分离。

化学稳定性：

在所有常用的液体缓冲液中保持稳定，PH 2-13，以及添加剂如去污剂（1%SDS），变性剂（8M尿素或6M盐酸胍啶）。填料在短链醇类中稳定，如乙醇，甲醇和丙醇，但是超过25%的浓度不经常使用。注意Sephadex在醇类溶液中会收缩。

储存：

没有使用的填料保存在4-25摄氏度20%乙醇中，不要冰冻。

今天的介绍就到这里啦，下周我们会继续介绍凝胶过滤层析相关知识和产品，请大家继续关注哦~

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