【罗工秘籍2】流式实验中死活染料的重要性&不能及时上机的样本保存方法

Q1：为什么做肿瘤或组织样本免疫亚群分析要标记cd45和死活染料，直接只检测对应的细胞marker不行吗？

A1：确实不行，借一位老师的数据现身说法，在未染死活和cd45时获取的cd11b+f4/80+的巨噬细胞群会夹杂带自发荧光的非免疫细胞从而导致cd206异常升高，从这个结果来看造成的偏差是巨大的，所以，有条件一定要染。

Q2：样本染色后不能及时上机怎么办？如何保存最稳定？

A2：如果不能及时检测能够固定么：可以。

如果不能及时上机检测，可将已经染色的细胞在1-4%的多聚甲醛（或BD Cytofix Buffer，货号：554655）中4℃固定30min，清洗细胞，之后用适量的Stain Buffer重悬细胞，4℃避光保存。固定的细胞需要尽快上机检测一般不应超过72h。

需要避免的两个误区：

1、并不是一直将样本处于多聚甲醛中！长时间的浸润会使荧光抗体中的荧光素淬灭，一定是固定15-30min后洗掉重悬于staining buffer中。

2、前面已经做过类似固定步骤（例如固定破膜）的细胞如果能确保24h内上机，实际上无需再次固定。如不能，推荐再次固定以稳定胞内抗体的结合。