【罗工秘籍4】在做免疫细胞分型时，CD45可有可无吗？

小R：罗工你好，前几天您帮我设计了一个肿瘤免疫亚群的（T细胞，B细胞，NK细胞，巨噬细胞，树突细胞，MDSC和几个免疫检查点）流式实验方案，但是我把我的方案拿去和我师姐讨论，她说没必要加一个CD45的指标，说免疫细胞都会表达呢，我可以删掉这个指标么？

罗工：先说结论：如果您做的实验是外周/脾脏/淋巴结的免疫亚群鉴定，样本处理比较理想的情况下CD45确实可有可无，但是如果您的样本不理想，或者实验对象是肝，脑，肺等组织器官/肿瘤/腹水等样本里的免疫细胞，CD45是非常有必要检测的。

小R：罗工，您可以再详细说明一下吗？

罗工：如果是外周/脾脏/淋巴结的免疫亚群鉴定，我们在进行红细胞裂解或者梯度密度离心后所获得细胞都是纯度非常高的PBMC，我们可以在流式细胞仪上通过FSC和SSC这2个形态学通道明确的选出免疫细胞，此时CD45就不是那么重要了。
但是也必须要说的一点，实际上我们碰到的情况是千变万化的，比如一些病人的样本或者是一些处理不好的样本，我们很难从FSC和SSC通道上获得明确的PBMC形态，此时就应该检测CD45来严谨的gate出免疫亚群了。

左图为分群清晰的外周血亚群，可以不染CD45；

中图为裂红不佳的外周血亚群，此时就推荐染CD45了；

右图为病人的外周血亚群，无法明确区分出免疫细胞形态，必须通过染CD45来判断。

小R：那我的样本是肿瘤组织里的免疫细胞，岂不是更难从FSC和SSC上获得免疫亚群？

罗工：没错，肿瘤等组织里的免疫细胞本身就很少，我们从肿瘤等组织中处理出来的单细胞悬液里大部分都是肿瘤/组织细胞，只有少部分才是CD45+的免疫细胞，并且非常要命的一点，组织细胞往往还会带有大量的非特异性，如果不染CD45的话会导致实验结果大量假阳性而无法分析。

小R：原来如此，GET到了，谢谢罗工！