L-ADCC体外检测方法学总结

抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC）是免疫系统对抗病毒感染及肿瘤疾病的一种重要免疫防御机制。

抗体通过与靶细胞表面抗原特异性结合，招募自然杀伤（Natural killer, NK）细胞等效应细胞杀死靶细胞。NK细胞表面表达FcγRIIIa蛋白，是一种抗体Fc区域的受体，能识别并结合抗体的Fc端，从而使NK细胞结合到靶细胞周围。一旦Fc受体与抗体的Fc区域结合，NK细胞就会释放细胞因子和细胞毒性颗粒，进入靶细胞触发细胞凋亡。

小编总结了几种常见的ADCC检测方法

报告基因| Britelite

利用生物发光报告基因检测，采用基因工程改造的Jurkat细胞作为效应细胞，该细胞稳定表达FcγRIIIa受体和由NFAT应答元件驱动表达的萤火虫萤光素酶。抗体与效应细胞表面的受体结合后，激发细胞内NFAT反应元件，NFAT反应元件驱动萤火虫荧光素酶的表达。荧光素酶活性可以通过生物发光进行定量。

PerkinElmer推出的Britelite ™ plus是一种超高灵敏度萤光素酶报告基因测定系统，用于定量哺乳动物细胞中萤火虫萤光素酶的表达。旨在为需要最高灵敏度的实验提供最大的信号强度，适用于96孔，384孔或1536孔微孔板。Britelite ™ plus半衰期30分钟，非常适合：1）需要超灵敏度的小体积样品分析；2）采用连续处理方法的高通量检测。

中检院有关新冠中和抗体活性评价的研究，就是基于珀金埃尔默发光试剂盒（Britelite ™ plus）。

HTRF

应用Tag-lite技术，在细胞表面表达用Lumi4-Tb标记过的CD16a，然后加入用d2标记过的人免疫球蛋白IgG,IgG与CD16a结合，会产生FRET信号，加入实验样本后，样本与标记过的IgG竞争性的与CD16a结合，FRET信号降低。

这种方法方法直接检测Fc段改造的工程抗体与Fc受体（CD16）的结合能力，可视为单抗体外筛选，或者是优化Fc段的高通量方法。

但要进一步检测效应细胞与靶细胞的作用时，需要引入铬51(51Cr)标记/释放法(Chromium release assay)等终点法检测ADCC,铬51(51Cr) 标记是检测ADCC最为经典的方法。将具有放射性的铬51与靶细胞孵育，铬51会进入靶细胞；洗去多于未进入细胞的铬51，再将靶细胞和效应细胞以及抗体共同孵育。如果靶细胞被杀伤，铬51就会被释放出来，检测溶液中的放射性同位素含量即可确认靶细胞被杀伤的情况。该方法是ADCC检测靶细胞被杀伤的金标准，然而因为带有放射性元素、费时费力且实验变化性大。因此有非放射性的检测方法被相继开发出来,其中应用较多的有PerkinElmer的DELFIA®cell cytotoxicity assay kit。

DELFIA®cell cytotoxicity assay kit ·

DELFIA®cell cytotoxicity assay kit利用与铬51标记/释放法类似的原理采用荧光方法来检测靶细胞的死亡。
DELFIA® EuTDA细胞毒法利用荧光放大配体BATDA特异的标记靶细胞。BATDA能迅速进入细胞，并在水解作用下形成亲水的TDA留在细胞内，并在靶细胞裂解下释放，和DELIFA Eu试剂相结合形成强荧光、稳定的螯合物EuTDA用于检测。

上面介绍的两种方法都是基于细胞膜的完整性与否来检测靶细胞是否被杀伤，采用同样原理的LDH法也可用于靶细胞的活力检测。

产品信息

产品名称	规格	货号	厂商
CD16a (FcgRIIIa, F158)^* cellular kit	100 tests 500 tests 1000 tests	6FR3APAG 6FR3APAE 6FR3APAF	Cisbio
BRITELITE PLUS	10mL 100mL 1000mL	6066766 6066761 6066769	PE
DELFIA® EuTDA Cytotoxicity Reagent	10 x 96 wells	AD0116	PE
LDH-Cytotoxicity Colorimetric Assay Kit II	500 assays	K313-500	BioVison

*同时也提供CD32a (FcgRIIa, H131/R131)，CD32b (FcgRIIb)，CD16a (FcgRIIIa, V158) 相关产品。

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