【罗工秘籍26】-什么是真正的阳性信号2

荧光减一（FMO，Fluorescence minus one）对照

如果只用到两种颜色的话，这个对照可以用单阳性对照代替，如果三种以上颜色的话，就需要再设置 FMO 对照来评估其他荧光染料的干扰和补偿本底，帮助正确设置阳性门荧光减一(FMO)对照，建立多色方案时是非常重要的，因为它们将帮助你确定感兴趣的门应该在哪里设置，尤其是在表达水平很低需要从较大百分比的阴性群体中识别阳性时，FMO特别重要。当获取多色数据时会有荧光散布的问题，特别是亮的荧光素在补偿和交叉激光激发之后特别明显。 FMO对照是用实验设计里的所有荧光减去一个荧光后染色的细胞样本， FMO矩阵的例子如下表所示：

如果按空白对照组设定界线之后得到的细胞比例和 FMO 设定的值有差异。以FMO为准，因为空白对照仅仅是设定阴性界线，但非阴性并不等于就是阳性，所以还需 FMO 来设定阳性界线。

生物学对照

生物学对照对于所有染色都是重要的，但对于具有更高背景荧光的细胞内染色更重要。生物学对照包括已知的阴性样品和已知的阳性样品。可以理解为文献中的Control或者是Vehicle组。如细胞内染色实验涉及固定和透膜，这些步骤会影响抗原检测，自发荧光，荧光素亮度和细胞形态，生物学对照显得更为重要。

未给药-低浓给药-高浓度给药

刺激和未刺激对照

当然大家要根据自己的实验情况选择适合自己实验方案的生物学对照，就不在这里一一举例了。

2期内容和大家分享了单染对照、isotype 对照、FMO对照和生物学对照，大家都学会了吗？这些是基本的圈门对照，帮助我们更严谨的判断阳性群体，大家都学会了吗？