ÄKTA组件介绍及使用小技巧

ÄKTA蛋白层析系统是一款方便易用、灵活直观的生物样品纯化设备，是研究多种生物样品如重组蛋白、抗体、疫苗、核酸、肽、多糖的好帮手。随着生命科学的蓬勃发展，ÄKTA在生物医药领域的用户也越来越多，今天小编就为大家介绍一下ÄKTA仪器的主要组件和使用小技巧哦！

01系统泵

在仪器下侧，可以看到两个精确的双元柱塞泵。每个泵都由一对泵头组成，所产生的连续低脉冲液流，能够进行可重现的线性和梯度洗脱。

使用TIPs：

1、润洗液每7天需要更换一次，更换润洗液时，需要将系统泵右侧的50ml离心管旋出，再更换入新鲜的20%乙醇即可。

2、系统如果进气泡，可以通过泵头排气泡。
排除气泡的方式有两种：
（1）通过手动命令：System Control - Manual - Manual instructions - Pumps and pressures - Pump wash - Inlet A / Inlet B / Sample Inlet，进行泵洗，高流速将气泡排出（流速和冲洗的时间系统默认）；
（2）通过手动命令System Control - Manual - Manual instructions - Flow path将需要排气的流路选好，然后在给定流速 1-2ml/min 下用注射器连接在泵头的抽气阀上，将抽气阀拧松半圈到一圈，缓慢抽取，直到有连续的液体流出，然后拧紧泵头即可。注意：每个泵头都要抽气。

02紫外监测器

U9-M紫外检测器可以在190nm-700nm的紫外和可见光范围内同时对3个波长进行吸光值的实时测定，能更好的的观察不同波长下蛋白的分离情况。U9-M使用高灵敏度的长寿命氙灯，具有极短的启动时间，每次仪器开启时，检测器自动校准。

使用TIPs：
1、如何清洗紫外流动池？
用注射器推甲醇或1M NaOH注入紫外流动池进行清洗，具体做法：连接一个注射器在流路池上端，下端接废液口，用 1M NaOH 和水反复冲洗，观察纯水的紫外吸收是否在1000mAu以下，必要时需要用10%的表面活性剂（如Decon 90）和水反复冲洗。

2、如果紫外检测曲线有噪音或者波动，怎么处理？
首先判断是系统原因还是接上柱子才出现的现象。
（1）系统原因（旁路by-pass或将层析柱拆下）
•    确认反压阀是否在线，如果不在线，可能是Buffer中的气泡析出导致的，需要对Buffer进行充分的脱气处理；
•    流路中有气泡，手动抽气或Pump wash几次以排出空气；
•    需要清洗紫外流动池
（2）柱子问题（不接柱子时，系统稳定；接入柱子后出现波动）
•    参照填料说明书CIP方法，清洗层析柱
•    柱子里有气泡：反压阀在线状态下以不超过系统和柱子耐压为前提，用脱气的去离子水冲洗将气泡带出。
•    样品里有表面活性剂或其他有紫外吸收的成分。如Triton X-100等本身有紫外吸收，需要较长的时间达到平衡。

3、ÄKTA start，ÄKTA go，ÄKTA pure，ÄKTA avant的紫外监测器分别是哪种光源？使用前是否需要预热？ÄKTA设备有多少监测波长？对于多波长监测器，如何更改波长？
ÄKTA 各型号仪器使用前均无需预热。
（1）ÄKTA Start、ÄKTA go和ÄKTA pure L标配LED光源，为单波长监测器，仅能监测280nm波长；
（2）ÄKTA avant和ÄKTA pure M标配氙灯光源，为多波长监测器，可在190-700nm范围内，在线同时监测任意三个波长。波长的更改在软件上可以直接进行，以ÄKTA pure M为例，更改紫外监测波长的路径如下：
a. 如果是编辑好的方法，路径为：Method editor -  Method settings - Monitor settings - 输入想要监测的波长；
b. 如果是手动操作，按以下路径执行：System Control - Manual - Manual instructions – Monitors – Wavelegth ，右侧框中有默认的监测波长，需要改变监测数量和监测波长的话先点击Off，再在框中输入想要监测的波长即可。
（3）如果监测寡糖，需要在ÄKTA上外接I/O box，连接示差监测器来达到监测的目的，如果是多糖，可以在204nm下监测。

4、如何实现在ÄKTA pure或avant运行过程中关闭UV紫外灯？在用水长时间冲洗的时候，希望关闭以免浪费紫外灯寿命。
（1）红色的仪器：ÄKTA start不可以单独关闭紫外；ÄKTA pure，ÄKTA  avant和ÄKTA go使用最新版本的仪器配置文件，可以单独关紫外灯。具体操作如下：
a．记录当前勾选的阀门模块：在Administration界面的System properties选项中，点击Edit，依次打开Components types，记录右侧Component selection勾选状态。
b．回到UNICORN软件中，在Administration管理模块的System Properties菜单下，选择Instruments Configuration菜单，点击Import，选择下载好的仪器配置（Instrument Configuration）文件，即导入成功。
c. 再次回到System Properties菜单，点击Edit，在上方Instrument configuration选项卡中选择新的仪器配置文件后，对Component types窗格内的组件按照之前记录的各模块勾选的状态进行新勾选，点击OK。
d．回到UNICORN的System control界面，在菜单栏的Manual - Manual instructions的Monitor子选项UV lamp即可进行开关紫外灯的操作。
（2）灰色机器：ÄKTA purifier 和ÄKTA explore 可以单独关闭紫外，在UV监测器的侧面有一个旋钮开关；ÄKTAprime plus可以在机身上通过Manual - Set parameter进行Lamp的开关操作；ÄKTA prime不可以单独关闭紫外。

5、如何查看紫外监测器的使用时间？
路径：System control – System - Maintenance manager -UV monitor，右侧Statistics即可查看。

03 PH阀

PH阀包含一个整合的PH电极，能够在运行期间在线监测流动相中的PH值。一个限流器被连接在PH阀上，会自动整合在流路中，会产生0.2MPa压力，以防止气泡形成。（如果超压可以关闭）
 
如何进行 pH 计校准？
1、pH 计校正：两点校正。System control – System – Calibrate - pH - Preparation for Calibration，用注射器将第一种校正液注入 pH 阀的矫正口，注意校正过程中不能拔掉注射器。读数稳定后点击 Calibrate，再换下一种校正液。校正完成后会自动报告校正成功或者失败。如果一直失败则考虑清洗 pH 电极，如清洗后没有改善，请考虑更换 pH 计。

2、如何进行 pH 电极的清洁？
1）盐沉积：0.1M HCl/ 0.1M NaOH/ 0.1M HCl 交替洗数次，间隔5 分钟。
（2）油脂沉积：1% SDS 清洗后水洗。
（3）蛋白沉积：1% 蛋白酶在 0.1M HCl的溶液中清洗后水洗。

*本文内容节选自Cytiva资料。