收视率登顶：【十分钟】学会多因子检测

一、为啥需要多因子检测？

1.检测实验动物/临床人的血清、血浆、脑脊液、房水、尿液等各类样本，只有微量样本，很珍贵怎么办？

——试试MSD，多因子检测技术，一个孔内实现多指标检测，复杂/珍惜样本免疫分析必备（只需25ul样本量，检测多个指标）

2.多个指标要检测，做多个ELISA太费事太贵，做ELISA检测不出，灵敏度、线性范围不够宽？

——试试MSD，6log线性范围：灵敏度提高，最高检测上限延伸。

和ELISA同样是板相技术，但一个孔可检测多种指标节约时间、样本、经费，并与单指标数据一致性好

3.样本中各指标表达浓度低，ELISA及其它多因子技术无法检出？

——试试MSD多因子检测技术，电化学发光原理，亚fg级别灵敏度，一个孔内实现多指标高灵敏检测，灵敏度远远高于其它技术

二、实现多因子检测的奥秘

MSD如何实现多因子检测？

（1）通过点阵技术，在96孔石墨电极板里的每个孔中的不同区域不同spot中预先机器点印上1-10种捕获抗体，从而实现1-10个指标/每孔的检测

通常MSD的V-PLEX试剂盒和Standar assay标准试剂盒都通过该方法实现多因子检测，下面是几款经典热卖的现货试剂盒：

品名	详情	货号
V-PLEX Human IL-17A Kit	IL-17A \| Human	K151RFD-1(现货)
V-PLEX Proinflammatory Panel 1(human)Kit	IFN-γ,IL-10,IL-12p70,IL-13,IL-16, IL-2,IL-4,IL-6,IL-8,TNF-a\|Human	K15049D-1 （现货）
V-PLEX Proinflammatory Panel 1(mouse)Kit	IFN-γ,IL-10,IL-12p70,IL-1β,IL-2,IL-4, IL-5, IL-6, KC/GRO, TNF-a Mouse	K15048D-1（现货）
V-PLEX Custom Rat Cytokine	IFN-γ, IL-6，TNF-α \| Rat	K153AOG-1（现货）
V-PLEX Aβ Peptide Panel 1 (4G8)Kit	Aβ38,Aβ40,Aβ42[Human，Mouse, Rat	K15199R-1（现货）

品名

详情

货号

V-PLEX Human IL-17A Kit

IL-17A | Human

K151RFD-1(现货)

V-PLEX Proinflammatory Panel 1(human)Kit

IFN-γ,IL-10,IL-12p70,IL-13,IL-16, IL-2,IL-4,IL-6,IL-8,TNF-a|Human

K15049D-1

（现货）

V-PLEX Proinflammatory Panel 1(mouse)Kit

IFN-γ,IL-10,IL-12p70,IL-1β,IL-2,IL-4, IL-5, IL-6, KC/GRO, TNF-a Mouse

K15048D-1（现货）

V-PLEX Custom Rat Cytokine

IFN-γ, IL-6，TNF-α | Rat

K153AOG-1（现货）

V-PLEX Aβ Peptide Panel 1 (4G8)Kit

Aβ38,Aβ40,Aβ42[Human，Mouse, Rat

K15199R-1（现货）

（2）借助linker将捕获抗体带到一个孔中的不同区域内，在一个孔内实现多因子检测。通常U-PLEX试剂盒就是通过该方法实现多因子检测。

1. Linker与捕获抗体连接：

U-PLEX plate每个孔内有1-10个spot，每个spot内有基座分别与不同linker匹配；linker有生物素结合区域，可以结合生物素化的捕获抗体。因此捕获抗体可以被linker带到相应的spot里。

例如检测四种指标，第一步，将四种指标对应的生物素化捕获抗体与四种linker，分别在四支管子内混合，分别完成linker与捕获抗体的偶联，之后加入stop solution终止反应。

2. Linker带着生物素化捕获抗体到一个孔的不同区域：

将四种Linker连接的捕获抗体混合制成混合液A。

将混合液A包被U-PLEX plate，不同的Linker就会带着连接的捕获抗体到相应的spot中，完成在同一个孔内包被多种捕获抗体，实现在一个孔内进行多指标检测（最多可在一个孔中实现10种指标的同时检测）

3. 后续流程同ELISA，完成实验

在板内加入样本进行孵育结合；

准备四种指标的检测抗体混合液（抗体带sulfo-tag标记），加入板内进行孵育结合；

加入read buffer读板液上机读板检测，根据各个spot相应位置的光信号值，定量各检测指标的浓度。

U-PLEX任意选取指标自由组合菜单

可选种属	可选指标
Human人	BAFF, BAFF-R/TNFRSF13C, BCMA/TNFRSF17, BDNF, CD20, CD27, CD28, CD40L (soluble), CD276/B7-H3, C-Peptide, CTACK, CTLA-4, ENA-78, Eotaxin, Eotaxin-2, Eotaxin-3, EPO, FGF (basic), FGF-23, FLT3L, Fractalkine, FSH, G-CSF, Ghrelin (active), Ghrelin (total), GIP (active), GIP (inactive), GIP (total), GITR/TNFRSF18, GITRL/TNFSF18, GLP-1 (active), GLP-1 (inactive), GM-CSF, gp130 (soluble), Granzyme A, Granzyme B, GRO-α, HAVCR2/TIM-3, I-309, IFN-α2a, IFN-β, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-2, IL-2Rα, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12/IL-23p40, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-17A/F, IL-17C, IL-17D, IL-17E/IL-25, IL-17F, IL-18, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, IL-29/IFN-λ1, IL-31, IL-33, Insulin, IP-10, I-TAC, LAG3, Leptin, Luteinizing Hormone (LH), MCP-1, MCP-2, MCP-4, M-CSF, MDC, MIF, MIP-1α, MIP-1β, MIP-5, OX40/TNFRSF4, PD1 (epitope 1), PD1 (epitope 2), PD-L1 (epitope 1), PD-L2, PlGF, PP, Proinsulin, PYY (total), RANKL/TNFSF11, SDF-1α, Tie-2, TIGIT, TLR1, TNF-α, TNF-β, TPO, TRAIL, TSLP, VEGF-A, VEGF-D, YKL-40
Mouse小鼠	BAFF, BCA-1/BLC, BDNF, CD40/TNFRSF5, C-Peptide, Eotaxin, EPO, FGF-21, Ghrelin (active), Ghrelin (total), GLP-1 (active), GLP-1 (inactive), GLP-1 (total), Glucagon, GM-CSF, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-12/IL-23p40, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-17A/F, IL-17C, IL-17E/IL-25, IL-17F, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27p28/IL-30, IL-31, IL-33, Insulin, IP-10, KC/GRO, Leptin, MCP-1, MCP-5/CCL12, MDC, MIP-1α, MIP-1β, MIP-2, MIP-3α, MMP-9 (total), PYY (total), RANTES, TARC, TNF-α, VEGF-A
NHP猴	CTACK, ENA-78, Eotaxin, Eotaxin-2, Eotaxin-3, FLT3L, Fractalkine, G-CSF, GM-CSF, GRO-α, I-309, IFN-α2a, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12/IL-23p40, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-17A/F, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17F, IL-18, IL-22, IL-23, IP-10, I-TAC, MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4, M-CSF, MDC, MIF, MIP-1α, MIP-1β, MIP-3α, MIP-3β, MIP-5, SDF-1α, TARC, TNF-α, TNF-β, TPO, TRAIL, VEGF-A, YKL-40