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一、为啥需要多因子检测？
1.检测实验动物/临床人的血清、血浆、脑脊液、房水、尿液等各类样本，只有微量样本，很珍贵怎么办？
——试试MSD，多因子检测技术，一个孔内实现多指标检测，复杂/珍惜样本免疫分析必备（只需25ul样本量，检测多个指标）
 

2.多个指标要检测，做多个ELISA太费事太贵，做ELISA检测不出，灵敏度、线性范围不够宽？
——试试MSD，6log线性范围：灵敏度提高，最高检测上限延伸。
和ELISA同样是板相技术，但一个孔可检测多种指标节约时间、样本、经费，并与单指标数据一致性好
 
3.样本中各指标表达浓度低，ELISA及其它多因子技术无法检出？
——试试MSD多因子检测技术，电化学发光原理，亚fg级别灵敏度，一个孔内实现多指标高灵敏检测，灵敏度远远高于其它技术
 
二、实现多因子检测的奥秘
MSD如何实现多因子检测？
（1）通过点阵技术，在96孔石墨电极板里的每个孔中的不同区域不同spot中预先机器点印上1-10种捕获抗体，从而实现1-10个指标/每孔的检测
 

（2）借助linker将捕获抗体带到一个孔中的不同区域内，在一个孔内实现多因子检测。通常U-PLEX试剂盒就是通过该方法实现多因子检测。

1. Linker与捕获抗体连接：
U-PLEX plate每个孔内有1-10个spot，每个spot内有基座分别与不同linker匹配；linker有生物素结合区域，可以结合生物素化的捕获抗体。因此捕获抗体可以被linker带到相应的spot里。
 
例如检测四种指标，第一步，将四种指标对应的生物素化捕获抗体与四种linker，分别在四支管子内混合，分别完成linker与捕获抗体的偶联，之后加入stop solution终止反应。

2.  Linker带着生物素化捕获抗体到一个孔的不同区域：
将四种Linker连接的捕获抗体混合制成混合液A。
将混合液A包被U-PLEX plate，不同的Linker就会带着连接的捕获抗体到相应的spot中，完成在同一个孔内包被多种捕获抗体，实现在一个孔内进行多指标检测（最多可在一个孔中实现10种指标的同时检测）
 
3.  后续流程同ELISA，完成实验
在板内加入样本进行孵育结合；
准备四种指标的检测抗体混合液（抗体带sulfo-tag标记），加入板内进行孵育结合；
加入read buffer读板液上机读板检测，根据各个spot相应位置的光信号值，定量各检测指标的浓度。
 
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