AlphaLISA®和HTRF®技术pSHP-2检测试剂盒

SHP-2是酪氨酸磷酸酶（PTP）家族中第一个被证实的原癌蛋白。SHP-2过度激活/表达可以提高酪氨酸磷酸化水平从而促进多种癌症的肿瘤生长和存活，反之，则能够抑制肿瘤细胞的生长。因此，通过阻断或抑制SHP-2的通路激活可以明显改善肿瘤治疗。
SHP-2位于细胞质中参与许多致癌信号传导级联（例如，RAS-ERK，PI3K-AKT，JAK-STAT）。据报道SHP-2与RAS结合和去磷酸化，增加RAS-RAF结合，并激活下游增殖性RAS/ERK/MAPK信号传导。SHP-2也参与T细胞程序性细胞死亡/检查点途径（PD-L1/PD-1）并有助于免疫逃避。活化的PD-1将SHP-2募集到膜上，使共刺激受体CD28去磷酸化并抑制T细胞功能。
如今抗PD-1和PD-L1治疗剂临床研究的成功，使得SHP-2跻身于现下抗癌的明星靶点。经过充分验证，SHP-2抑制剂可用于肺腺癌，结肠癌和乳腺癌的治疗研究中。

一、AlphaLISA®
1.1实验原理
该检测试剂盒包含特异性识别磷酸化tyr542表位的抗体，或SHP-2上的不变表位。可以识别人类和小鼠来源的SHP-2。PerkinElmer p-SHP-2 (Tyr542)试剂盒是基于是基于增强的化学发光（AlphaLISA）的一种均相免疫检测技术，实验原理如图所示↓，包被有链霉亲和素的供体微珠可以捕获生物素化的抗体，受体微珠包被有专有的CaptSure™试剂，可以结合带有CaptSure™标签的抗体。
在靶蛋白p-SHP-2 (Tyr542)存在的情况下，这两种抗体使供体和受体微珠紧密结合，在680nm激光照射下，供体微珠上的光敏剂将周围环境中的氧气转化为更为活跃的单体氧。单体氧扩散至受体微珠，产生一系列的化学发光反应，最后将能量传递到铕，发射波长为615nm，发光信号与样品中存在的p-SHP-2 (Tyr542)含量成正比。
 

1.2技术优势
1.2.1灵敏度高，线性范围宽；
1.2.2样本需求量少，可以兼容细胞培养上清，细胞裂解液，血清，血浆等样品；
2.3操作简单，无需包被和洗板。

1.3实验流程及结果
先将受体微珠加入到细胞裂解液中，孵育1-2小时，再将供体微珠加入混合液中，孵育1-2小时，即可读板。下图为p-SHP-2(Tyr542)和Total SHP-2蛋白的检测结果。
（读板仪器需兼容ALpha技术，如：PerkinElmer® VICTOR® Nivo™）。
 
 

1.4相关产品推荐

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二、HTRF®
2.1技术原理
该方法用于简单、快速和直接检测细胞内源性SHP2水平，仅当Tyr542位点磷酸化时，使用试剂盒检测phoshoSHP2(Tyr542)。
当用Eu标记的供体和用d2标记的受体相互靠近时，用光源（激光或闪光灯）激发供体，会触发向受体方向的荧光共振能量转移(FRET)，进而在特定波长（665nm）发出荧光。特异性信号与磷酸化SHP2（Tyr542）成正比。如图所示：
 

2.2技术优势
2.2.1灵敏度高，实验窗口大；
2.2.2样本需求量少；
2.2.3无需包被和洗板；
2.2.4实验体系稳定。

2.3实验流程
实验步骤非常简单，无需避光，适用于贴壁细胞和悬浮细胞，只需将细胞进行刺激→裂解→加检测试剂→读板。
（读板仪器需兼容HTRF技术，如：PerkinElmer® VICTOR® Nivo™）。
 

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