PCSK9抑制剂筛选解决方案

中国的高胆固醇血症患病率从2014年的69.8百万人增至2018年的82.6百万人，预期2030年将达到116.7百万人。

PCSK9抑制剂的其中一种主要目标适应症为高胆固醇血症，通过抑制PCSK9蛋白以实现降脂、心血管风险管控等。

PCSK9即前蛋白转化酶枯草溶菌素9，是胆固醇代谢的关键分子，在外源胆固醇的摄取中发挥着重要的调节作用。降低PCSK9水平可使细胞表面LDLR（低密度脂蛋白受体）表达升高，LDL-C（低密度脂蛋白胆固醇）清除增加，从而降低循环中LDL-C水平。

2015年全球首个PCSK9 抑制剂类降脂药诞生，之后两项大型临床RCT研究分别证实了PCSK9抑制剂可在ASCVD/ACS人群中将LDL-C在他汀基础上进一步降低 50%以上，主要不良心血管事件也显著降低。

2020年11月11日，来自杜克大学课题组联合中山大学医学院、上海交通大学第一人民医院以及复旦大学肿瘤医院的研究人员发表于《Nature》杂志上的一项研究，题为《Inhibition of PCSK9 potentiates immune checkpoint therapy for cancer》，将同样研究火热的PCSK9与PD-1联系在了一起。
 
团队通过一系列实验揭示了PCSK9可以与MHC I直接相互作用，并且可以参与调控MHC I分子在溶酶体内的降解，而抑制PCSK9则可以有效减少MHC I在溶酶体中的降解，显著提高肿瘤细胞表面MHC I的表达和抗原递呈，从而增强机体抗肿瘤免疫应答揭示了PCSK9对肿瘤免疫治疗的潜力，能够有效提高肿瘤对免疫检查点抑制剂的响应。

PCSK9-LDLR结合的研究有助于开发治疗性抗PCSK9抗体，有效阻止细胞表面的这种相互作用。因此，PCSK9是作为他汀类药物之后公认的最有效的治疗心血管疾病的明星降脂靶点。

今天小编为大家提供了具备高灵敏、免洗、线性范围宽等优势的AlphaLISA技术来检测PCSK9/LDLR的Binding Kit...可用来对PCSK9抑制剂的筛选哦，快快开始记笔记吧...
 
实验原理如图所示：使用抗His的AlphaLISA®受体微珠来捕获His标记的PCSK9和链霉亲和素包被的供体微珠来捕获生物素化的LDLR。供体微珠和受体微珠通过PCSK9与LDLR的结合而靠近。供体微珠受到激发（680nm激光）会触发单线态氧的释放至受体微珠，在615nm处产生光信号。
 
实验流程很简单哦→空板依次加入5 µL of each antibody dilution or 5 µL of sample，5 µL of His tagged PCSK9，5 µL of  Biotinylated LDLR，5 µL of a 4X MIX anti-6xHis AlphaLISA Acceptor beads and SA-Donor beads，孵育90min后即可使用酶标仪读板。（酶标仪需支持Alpha模块）

实验结果展示：
抗PCSK9抗体阻断PCSK9/LDLR结合IC50=0.71nM。以Human IgG1作为阴性对照。
 
抗LDLR抗体阻断PCSK9/LDLR结合IC50=3.5nM。Goat IgG作为阴性对照。
 
非His标记的PCSK9和非生物素化的LDLR与PCSK9/LDLR竞争性结合。IC50值分别为448nM和45.8nM。
 
此外，小编这里还有AlphaLISA、HTRF和LANCE技术的PCSK9的定量检测试剂盒哦...超多呢！切记，一定要使用对应模块的酶标仪哦！

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酶标仪
HH35000500	PerkinElmer VICTOR Nivo