HTRF®技术在胰岛素定量检测中的应用

不同样本胰岛素的精准定量对胰岛素分泌的临床前研究至关重要。 目前的检测方法依然依赖于传统的ELISA方法。多年来，研究人员一直在寻找一种理想的胰岛素检测方法，它能将特异性、灵敏度、准确性、低样本消耗和易用性结合起来。
HTRF技术胰岛素定量分析线，旨在显著缩短检测时间、减少样本消耗和胰岛素定量的成本。以下所有的检测方法都已在胰岛素释放的相关细胞模型上得到验证，并且它们与已建立的方法具有高度的相关性。
HTRF技术使用两种单克隆抗体的三明治夹心免疫分析法，一种用供体荧光团标记，另一种用受体荧光团标记。获得的FRET信号强度与样品中胰岛素浓度成正比。该方法设计方便使用，不需要冗长的提取程序或样品预处理，也不需要任何洗涤步骤。只需添加检测试剂并读取。
实验流程与ELISA对比如下图所示：
 

Insulin Mouse Serum Assay Kit

下面要讲的胰岛素小鼠血清检测试剂盒在血清和血浆样本中胰岛素的精准定量中呈现出高度特异性和敏感性。该方法建立在一个均相检测方案上，不需要任何洗涤和分离。

实验结果展示：

特异性：只检测胰岛素，而不检测与胰岛素相关的多肽。灵敏度：0.064 ng/mL。线性范围：0.24 to 8 ng/mL。
下面是验证实验结果展示：
 
1、正常小鼠血清样本，禁食过夜或正常喂养的C57BL/6J小鼠的血清。
2、糖尿病小鼠血浆样本，雄性小鼠心脏穿刺采集样本，用K3 EDTA制备血浆。db/db糖尿病患者或db/+对照组，禁食过夜。
3、与ELISA的相关性。HTRF小鼠胰岛素血清检测显示，低滴度和高滴度的血清与化学发光和比色ELISA具有极好的相关性，R²=0.979和R²=0.913。
Insulin High Range Assay Kit
在实验中遇到高浓度的样本时，通常需要在胰岛素定量之前进行稀释，这是一个繁琐的步骤，可能会导致检测结果不准确，并延长得到结果的时间。由于HTRF技术在胰岛素定量前没有洗涤步骤且动态范围达到4log，Insulin High Range Assay Kit减少了样本稀释并提高了高浓度样本岛素定量的准确性。

试剂盒结果展示：

灵敏度：0.036 ng/mL。线性范围：0.61 to 150 ng/mL。
验证实验结果展示如下图：
 

1、MIN6小鼠 β 细胞和INS-1E大鼠 β 细胞经培养后，KRBbuffer刺激细胞10min、30min和2h并在葡萄糖浓度增加时曲线变化并得到EC50分别为：0.0087M、0.0097M和0.0063M。
2、与RIA方法相关性良好，R2=0.911。

Insulin Ultra Sensitive Assay Kit

HTRF胰岛素超灵敏分析法的灵敏度约为4pg/mL，它在设计时考虑到了宝贵的样品经济效益，并允许显著减少每次测试所需样本量。
验证实验结果展示如下图：
 
1、从C57BL/6N雄性小鼠中分离出胰岛。胰岛分配在2.8mM或16.7mM葡萄糖的KRB缓冲液中孵育。在孵育10分钟（左）或30分钟（右）后，收集上清检测到的胰岛素浓度。
2、与RIA方法相关性良好，R2=0.946。
 

使用HTRF平台测量胰岛素，比起传统 ELISA 技术具有巨大的优势。HTRF提供了ELISA的特异性、灵敏度和准确性，但是检测时间和样本需求量大幅度减少。
Insulin Mouse Serum Assay Kit是在宝贵的血清样本中胰岛素定量的理想选择。4log动态范围的Insulin High Range Assay Kit避免了高浓度样本稀释。高灵敏Insulin Ultra Sensitive Assay Kit甚至可以在难以测量的样本中检测到最低浓度的胰岛素。

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酶标仪
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