外泌体自从13年登上了科研巅峰--诺贝尔生理学或医学奖之后,热度就如常年挂在热搜上的四字弟弟,出现在各类基金中已经成为常态,数据更是位列榜首,您的项目分了多少呀?(让我看看)
小优家族(抗体大哥、流式姐姐、分子小弟以及Labex妹妹)都发过多种外泌体相关的好文,看官们感兴趣可直接关注微信矩阵搜索获取哦~今天怼怼分享一个你最需要的外泌体纯化和鉴定的专业流程!
由于有限的起始样本量和不同的样本制备方法,EV制剂的鉴定也有很大的不确定性,
对于EV蛋白的含量,“Minimal Information for Studies of Extracellular Vesicles”(MISEV2020)指南建议对跨膜、胞质和污染的非EV蛋白的制剂进行表征。以下即为一套简单、实用的外泌体蛋白鉴定流程~
整个workflow使用从exoEasy™试剂盒(QIAGEN)中洗脱的完整EV,直接加入在Jess仪器上进行Western Blot,利用这个工作流程检测了MISEV指南的第1、2和3类中的9个突出目标。结果如下图所示,exoEasy单次分离得到250µLEV洗脱液,由于该方法(4µL)或总蛋白检测(如BCA分析)的输入要求较低,可用于>60单个蛋白分析。
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货号 | 名称 | 描述 |
76064 | exoEasy Maxi Kit (20) | 用于纯化外泌小体及其他细胞外囊泡的exoEasy实验方案不仅比超速离心更加快捷,而且可获得更洁净的纯化产物。扫描电子显微镜显示两种技术均可提供完整的预期尺寸的囊泡,不过通过超速离心法制得的样品中还含有一些并不符合EV尺寸或外形的更小的结构。 |