第三代免疫分析技术——神经疾病研究领域用户专访

随着研究的深入，越来越多的学科工作者对免疫学技术提出了更高的要求：更宽的线性范围，更高的灵敏度，更多的可检测指标，更微量的样本检测体积，更开放的平台，更简单的设备操作….
在神经领域，脑脊液血清血浆等微量样本中蕴含着大量的信息，如何借助用力的工具帮助破解疾病发展的密码，我们一起来看看本期邀请到的研究者，他们对现阶段使用的蛋白精准定量技术的一些看法和使用感受！

中科大MSD技术平台

Q
小优：戴博：您好，我是小优，很高兴有机会跟您做这次采访！请问您主要研究什么方向呢？
中科大受访者（戴博：）：我们组是关注神经退行性疾病。

Q
小优：研究中一般会关注哪些指标？
戴博：：神经领域的相关蛋白都会看。我们是神经系统，但是方向比较广，神经的，炎症的，不局限神经的几个marker，还有一些新的靶点我们自己也会做方法学开发检测。

Q
小优：项目中蛋白检测您会使用到哪些技术方法呢？
戴博：：我们最早使用的是Elisa，后来luminex，然后simoa，MSD是我们最新使用的技术。

Q
小优：从酶链免疫到液相多因子，第三代电化学MSD，技术方法真的非常齐全了。戴博：您在实验设计中，会如何选择技术平台呢？
戴博：：主要两个考量，一个是灵敏度，我们有些确实浓度比较低，所以需要用到特别灵敏的方法，还有一个是价格，我们会综合判断一下，哪种方法既能很好的检测到同时性价比又比较高。

Q
小优：那综合起来哪种技术会使用比较频繁呢？
戴博：：Luminex现阶段用的比较少，早期会多一些，因为技术比较成熟。我们有时候需要同时测7,8个指标均算下来比较划算，但是有时候检测下限不够，一些指标检测不到，而且机器是液流路系统，有时候会出一些问题，所以我们换了方法。

Q
小优：是的，相比液流路系统，MSD电化学平台作为第三代技术方法，灵敏度更高，25ul的样本可以同时检测10个指标，机器使用简单，确实在技术发展上有了更好的体现。

Q
小优：您们现阶段样本检测类型有哪些呢？
戴博：：血清、血浆、脑脊液，这些都有。

Q
小优：脑脊液珍贵微量样本，一般用MSD成品试剂盒直接检测吗？
戴博：成品试剂盒以及用MSD平台开发，我们都有。

Q
小优：MSD开发实验整个流程还顺利吗？
戴博：：还可以，我们还是蛮熟练的，跟Elisa步骤方法差不多。

Q
小优：是的，都是双抗夹心的原理。
戴博：：是的，实验中会有一些自主优化的地方。现阶段遇到的主要问题是我们自己的抗体，有时候不太行，尝试十几种一直测不出来，也有比较幸运的，一两种就可以测出来，测出来之后根据效果可以慢慢再优化。

Q
小优：确实抗体对于开发实验至关重要。戴博：，MSD拥有非常强大的应用科学家支持团队，他们项目经验非常丰富，实验过程中有任何问题也欢迎您们随时联系MSD进行沟通交流。
戴博：：好的，有些MSD提供成品试剂盒我们大概率会直接上成品，自己开发的项目主要在价格方面还是有很大的优势的。

Q
小优：是的，MSD作为开放的平台，自主开发实验在成本会有很大的节约。您们现在开发实验都是在MSD平台上实现吗？
戴博：： 对，大部分都是用MSD做开发。

Q
小优：好的！除了相关的开发耗材。MSD在试剂盒研发上也一直没有停止脚步，经过几年研发沉淀，今年推出了神经关键指标 tau蛋白的飞克级别splex高敏检测试剂盒以及splex炎症9因子，希望能为您们的研究带来更大的帮助！
戴博：：  对，我们也购买了Splex准备测试看看。

Q

小优：好的，后续MSD平台使用过程中有任何实验方案设计、技术细节或流程问题欢迎随时联系我们，祝您们实验顺利，感谢您的时间！
戴博：：好的，谢谢你们！
 

第三代免疫分析技术平台MSD——在神经领域的应用：
技术介绍
Meso Scale Discovery (下称MSD) 是目前世界前五的免疫分析技术供应商，也是目前首屈一指的第三代免疫学分析仪供应商。MSD技术是利用专利的SULFO-TAG标记，电化学发光技术、微孔板技术的Multi-array多阵列技术，拥有超高灵敏度和极宽的动态检测范围，操作简单，通量高。在神经退行性疾病研究领域，MSD与AAIC协会，ADNI，华盛顿大学，GSK，英国帝国理工，香港科学大会，华中科技大会，瑞金医院，北京大学第三医院，宣武医院，中检院等学术组织或研究机构长期合作，并在Nature等顶尖期刊发表多篇高水平文献。
  

文献案例
 

本研究检测了aβ34在BACE1缺陷小鼠的大脑、用BACE1特异性抑制剂治疗的大鼠的大脑和脑脊液中的水平和代谢，培养的人神经细胞系（sh-sy5y）和AD不同临床阶段个体的CSF样品。为了实现这一点，研究者使用MSD电化学发光免疫分析技术，使用一种单克隆新表位抗体，该抗体与具有纳米分子亲和力的β34的c-末端特异结合。
 

结果表明，脑BACE1水平在体内对aβ34的产生是有限制的。特别是，在特征良好的临床组中，轻度认知障碍（MCI）患者的脑脊液Aβ34水平显著升高，这些患者后来发展为AD痴呆与经典的aβ40/aβ42比值（即临床上淀粉样沉积的标志物）相比，aβ34/aβ42比值提高了我们区分MCI患者和非MCI患者的能力。在有AD危险的认知正常个体中，csf-aβ34/aβ42比值升高与临床前AD的当前生物标记物一起被检测到，如csf总tau（t-tau）和磷酸化tau（p181）水平升高。此外，淀粉样蛋白阳性（aβ+）个体的aβ清除率与csf-aβ34水平呈正相关。
 

MSD神经相关蛋白检测试剂盒
MSD技术只要25ul样本就可以同时检测Aβ38、Aβ40、Aβ42 可以很好的节约珍贵样本 。
神经退行性疾病研究最常使用的Biomarkers涉及：APP • Aβ38 • Aβ40 • Aβ42 • NFL• NFH• Cystatin C • DJ-1/PARK7 • KC/GRO • MCP-1 • TNF-α • Tau • VEGF-A • α-Synuclein • IL-2 • Enolase 2 • LRRK2 • LRRK2 (pS935) 等。

品名	货号	检测指标
V.-PLEX:ABPeptidePanel·1-(4G8)- Kit.	K15199E-1	Aβ38,Aβ40,Aβ42·Human,Mouse, Rat
飞克灵敏度:SLEX·Human·Tau (pT181)Kit.	K151AGMS	Tau(pT181)·Human.
飞克灵敏度:S-PLEX·Human·Tau (pT231)Kit.	K151AGNS	Tau(pT231)Human-
飞克灵敏度:S-PLEX·Human·Tau (total)-Kit.	K151AGPS	Tau(total)/Human.
飞克灵敏度:S-PLEX: ProinflammatoryPanel-1-(human)- Kits	K15396S	IFN-Y;IL-1β,·IL-2,·IL-4,·IL-6,IL-10, IL-12p70,-IL-17A,TNE.a.
.PLEX·Neuroinflammatiom-Panel-1- Human·Kit.	K15049D-1	CRP,Eotaxin,-Eotaxin-3,FGF· (basic),ICAM-1,-EN-y;IL-1a,IL-1β; IL-2,IL-4,·1L-5,·1L-6,IL-7,·IL-8,·IL- 10,IL-12/IL-23p40,IL-13,IL-15,·IL- 16,IL-17A,IP-10,MCP-1,MCP-4,; MDC,MIP-1a,MIP-1β,·PlGE,-SAA, TARC,Tie-2,TNF..a.-TNE. VCAM-1,·VEGE.-A,"VEGEC, VEGE- D VEGFR-1/Flt-1.
R.-PLEX·Human-NeurofilamentL- Assay with-SECTORTM-plates.	K1517XR-2	Neurofilament-L

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