HTRF®技术在免疫检查点研究中的应用

前沿案例——助力PD-L1/PD-1免疫检查点药筛
阻断PD-L1和PD-1结合已被证明是治疗多种癌症的有效治疗方式。与抗体相比，小分子可以显示出增加的组织渗透性，独特的药理学，和潜在的增强的抗肿瘤活性。2022年3月7日，Incyte的研究人员在《Cancer Discovery》杂志发表文章关于一种PD-L1小分子抑制剂INCB086550的研究。
 

本文阐述了一种新型的、口服的、小分子的PD-L1抑制剂INCB086550的鉴定和表征。在体外，INCB086550选择性且有效地阻断PD-L1/PD-1相互作用，诱导PD-L1二聚和内化，并诱导原代人类免疫细胞中刺激依赖的细胞因子的产生。在体内，INCB086550降低了CD34+人源化小鼠的肿瘤生长，并诱导了T细胞激活基因信号，与PD-L1/PD-1通路阻断一致。一项正在进行的I期研究的初步数据证实，外周血细胞中PD-L1/PD-1阻断，增强免疫激活和肿瘤生长控制。这些数据支持了INCB086550作为抗体碱基的替代品的持续临床评估。

生化水平抑制剂筛选
基于HTRF的PD-L1/PD-1分子水平结合实验检测发现，INCB086550可以结合人源、食蟹猴和大鼠源PD-L1蛋白，但和小鼠P

D-L1蛋白的结合未检测到。与PD-L2无结合，表明INCB086550对PD-L1的特异性好。基于流式细胞术细胞水平活性检显示，用INCB086550阻断了PD-1蛋白与CHO细胞表面PD-L1蛋白的结合作用，还能阻断anti-PD-L1单抗atezolizumab和durvalumab对PD-L1的结合，表明INCB086550和anti-PD-L1单抗竞争结合位点提示INCB086550和抗PD-L1单克隆抗体竞争重叠结合位点。

INCB086550的作用机理研究
细胞水平评价INCB086550对PD-1信号传导和免疫激活的作用。INCB086550明显抑制PD-1与PD-L1结合对SHP-1/2磷酸酶的募集作用，促进TCR信号转导以及NFAT通路的激活，表明其对PD-L1/PD-1通路的功能性抑制。在人原代细胞中，INCB086550可以剂量依赖性地促进IFNγ的分泌，表明对T细胞的激活作用。

INCB086550的药代/药动
INCB086550的组织分布不依赖于PD-L1的表达（PD-L1-的HT-29移植瘤与PD-L1+的MDA-MB-231移植瘤），具有较高的肿瘤/血浆比。数据表现良好。
 
INCB086550在肿瘤中的免疫介导机制
利用人源化小鼠癌症模型来评估INCB086550的体内活性。INCB086550与PD-L1的结合毒性T细胞浸润，显著抑制MC38 huPD-L1的肿瘤生长，但对免疫缺陷鼠无效，表明INCB086550的抗肿瘤药效依赖于免疫作用。在MDA-MB-231移植瘤模型上的抗肿瘤效果与此一致。
 
INCB086550诱导癌症患者的免疫激活
正在进行的I期研究中，评估了活性的药效学标志物，包括INCB086550与PD-L1的结合、IFNγ通路下游标记物的测量以及无细胞PD-L1的水平。结果表明，免疫激活标志物和可溶性PD-L1的增加在较高剂量时通常更高。
 
 
综上所述，临床研究的评估表明，口服INCB086550提供了与报道的PD-L1或PD-1治疗性抗体相似的剂量相关的药效学免疫激活，并证明INCB086550在阻断PD-L1/PD-1相互作用方面具有生物活性，从而导致T细胞活化。
INCB086550被确定为PD-L1/PD-L1的有效抑制剂，具有与临床批准的PD-L1抗体相当的临床前活性，并具有新兴的临床活性，这支持了其正在进行的患者中的研究。因此，小分子PD-L1抑制剂可能是恢复癌症患者抗肿瘤免疫的一种重要和有效的替代方法。

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