指南 | Lonza 电转条件优化指南及常见问题

 

本期我们将为您提供优化 4D-Nucleofector™ X 单元的 Nucleofection™ 条件的指南，及有关该主题的常见问题。

Q：Nucleofector™ I 或 II 条件是否与 4D-Nucleofector™ X 单元兼容？
4D-Nucleofector™ 系统基于升级后的 Nucleofector™ 技术，并具有以下主要改进：
· 两种 Nucleofection™ 体系(20ul和100ul)，且实验条件可以互相转移
· Nucleocuvette™ 由导电聚合物而非铝组成，提高了细胞活力
· 简化的 4D-Nucleofector™ 试剂
· 更广泛的程序来微调您的优化
由于这些差异，为 Nucleofector™ I 或 II 设备推荐的解决方案对 4D-Nucleofector™ 系统无效。然而，在 4D-Nucleofector™ X 单元上运行优化是一个潜在改善 Nucleofection™ 结果的绝佳机会。

Q：可以优化哪些参数？
· 在 Nucleofection™ 优化中，最重要的参数是 Nucleofector™ 试剂和程序。

Q：我应该使用什么底物进行优化？
· 无论您感兴趣的底物（质粒、siRNA、蛋白质或化合物）如何，我们始终建议使用我们的 pmaxGFP™ 载体进行优化。使用 pmaxGFP™ Vector 进行优化消除了许多变量，例如底物制备的性质和质量以及分析时间。

Q：我应该以什么 Nucleofection™ 体系进行优化？
· 4D-Nucleofector™ X 单元旨在简化优化步骤。我们建议使用 20 μl Nucleocuvette™ Strips 进行优化，减少珍贵细胞的消耗。确定最佳条件后，您可以使用相同的方案，通过将细胞数量和底物数量乘以 5 来简单地切换到 100 μl Nucleocuvette™。

Q：如何优化 4D-Nucleofector™ X 单元上的 Nucleofection™ 条件？
首先我们将访问Lonza 开放的数据库，knowledge.lonza.com查找相关程序及方案。
当您的细胞没有推荐的方案时，将适用以下三种情况之一：
· 如果没有任何可用的建议，则开始第一轮优化。几种 Nucleofector™ 试剂（原代细胞的 P1 至 P5 和细胞系的 SE、SF 和 SG）中的每一种都将使用 15 个不同的程序进行测试。
· 遵循基本的 4D-Nucleofector™ X 单元方案（如果有）。使用少量的程序 (6–7个) 测试一个或两个 Nucleofector™ 试剂。
· 数据库描述了 4D-Nucleofector™ X 单元的 Nucleofection™ 条件和数据。您可以选择测试它们或返回前两个选项之一。

Q：何进一步改善我的 Nucleofection™ 条件？
一旦从第一轮优化中获得 Nucleofection™ 的结果，您可以使用我们基于 Web 的优化表格请求我们的反馈，或将您的结果通过电子邮件发送至：
scientific.support@lonza.com
参考下方的优化策略，可能会改善您的 Nucleofection™ 结果：
· 在表格中选择效果最好的初始程序（例如 DN-100）。表格中间垂直列出的是第一轮优化中描述的 15 个程序。
· 使用所选程序左侧的程序来提高细胞活力（例如 DH-100）。使用右侧的程序来提高转染效率（例如 ER-100）