药物研发前沿技术—— HTRF&Alpha

Interaction is everything
在任何药物研发进程中，分子间的结合研究是非常重要的事情，包括小分子互作、大分子互作、信号通路、酶活检测等等，都离不开对结合的分析与研究。HTRF与Alpha都是在药物研发、分子互作研究领域中被广泛青睐并应用的技术，今天小优就来为大家介绍一下这两项技术的特点及优势。

一、HTRF
HTRF（均相时间分辨荧光， Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是一种基于FRET（荧光共振能量转移）及TRF（时间分辨荧光）技术原理的、用来检测纯液相体系中待测物的技术。 

其中，FRET是由光质发光再引起发光的技术，具有空间选择性，在较近距离结合时才会发生能量转移，这为免洗操作、自动化打下了基础；

Donor与Acceptor距离较远，无FRET

Donor与Acceptor距离较近，产生FRET

TRF技术，采用镧系元素进行标记，其超长的半衰期成功去除了来自于受体及基质的荧光信号干扰，淬灭时间可达μs、ms级别，为提升信号稳健性、扩展窗口打下了基础。

HTRF将以上两种技术的优势特点完美保留：

1.从头到尾都均相
    无需洗板，可以实现全程极简、快速操作，大大提高筛选通量；

2.结合稳定，信号稳定，窗口优秀；
    此外HTRF还有其独特的优势忒点：

3.数据客观真实
    在数据处理过程中，HTRF采用比值法，可以去除背景荧光，排除溶液通透率、细胞大小、细胞数量不同引起的误差，假阳性率、假阴性率低

4.应用广泛
    GPCR；激酶活性；生物标志物；细胞因子检测；抗体检测；免疫过程分析；免疫检查点检测；互作分析；蛋白修饰等

5.操作简单
    空板直接加样，加完即可检测，精简操作流程至2h（加样+孵育）

6.适合珍贵样本
    对实验体系的限制低至20μL

7.均相检测
    无需包被，免洗ELISA，省时省力

8.体系稳定
    七天内可随时检测，信号基本保持不变

Perkin Elmer | Cisbio部分热卖试剂盒
1.细胞因子检测

货号	品名	规格
62HIFNGPEG	Human IFNy kit	500 tests
62HIL02PEG	Human IL2 kit	500 tests
62HIL06PEG	Human IL6 kit	500 tests
62HIFNAPEG	Human IL1β kit	500 tests
62HTNFAPEG	Human TNFa kit	500 tests

2.磷酸化蛋白检测

货号	品名	规格
64AERPEG	ADV. ERK P-T202/Y204 KIT	500 tests
64AKSPEG	AKT PHOSPHO-S473 KIT	500 tests
62AT3PEG	STAT3 PHOSPHO-Y705 KIT	500 tests
64AT5PEG	STAT5 PHOSPHO-Y694 KIT	500 tests

二、Alpha
Alpha检测是基于增强型化学发光原理的均相检测方法，通过激发供体微珠，传递单线态氧（singlet oxygen）到受体微珠（扩散距离约为200nm），进而产生615nm的光信号，信号强度与被检测物的浓度正相关。

包被了链霉亲和素的供体微珠结合生物素化的抗体，与检测蛋白、受体微珠偶联抗体形成三明治夹心结构。其中，Donor Bead的表面涂布高浓度光敏剂，所以操作时需要最后加入并且避光进行；Acceptor Bead上偶联了由CaptSure专利技术连接的抗体，需在加入待测样品后加入。

基于化学发光原理，使得Alpha检测的灵敏度大大提高，可达10amol，线性范围在3 -5个数量级，可进行生理状态下生物样品的检测，尤其是血液样品。

其次，Alpha技术还有以下独特优势
1.避免了繁琐的洗涤步骤，操作简单；
2.单线态氧每秒可产生60000个，扩散直径在200nm，信号强；
3.微珠直径250nm，可结合200~300个抗体，可进行低亲和力生物分子的检测
4.功能强大：几乎可以测定任意目标分析物
5.快速：耗时不及标准ELISA的一半
很多跨国公司，如葛兰素史克、诺华、诺和诺德等都采用了Alpha技术进行免疫检测和药物筛选

Perkin Elmer 部分Alpha试剂盒
1.神经科学领域

Product Description		Part Number	Part Number	Part Number	Part Number
		500 Assay Points	5,000 Assay Points	100 Assay Points	Standard
Amyloid p 1-40	Aβ 1-40	AL202C	AL202F		AL202S
Amyloid p 1-42	Aβ 1-42	AL203C	AL203F		AL203S
Amyloid p 1-42 (high specificity)	Aβ 1-42 (high specificity)	AL276C	AL276F		AL276S
Amyloid 0 1-x	Amyloidβ1-x	AL288C	AL288F
Apolipoprotein E	ApoE	AL395C	AL395F	AL395HV	AL395S
Beta-Nerve Growth Factor	P-NGF	AL246C	AL246F		AL246S
Frataxin	Frataxin	AL322C	AL322F	AL322HV	AL322S
GAD67	GAD67	AL397C	AL397F	AL397HV	AL397S

2.第二信使

Product Description		Part Number	Part Number	Part Number
		1000 Points	10,000 Points	50,000 Points
Inositol monophosphate	IP-One	AL3145D	AL3145M	AL3145R
Cyclic adenosine monophosphate	cAMP	6760635D	6760635M	6760635R

3.肿瘤学领域

Product Description		Part Number	Part Number	Part Number	Part Number
		500 Assay Points	5,000 Assay Points	100 Assay Points	Standard
4-1BB ligand	4-1 BBL	AL3108C	AL3108F	AL3108HV	AL3108S
a-tubulin	a-tubulin	AL3130C	AL3130F	AL3130HV	AL3130S
Alpha-1 Anti-Trypsin	A1AT	AL344C	AL344F	AL344HV	AL344S
Alpha-Smooth Muscle Actin	alpha-SMA	AL3143C	AL3143F	AL3143HV	AL3143S
B- and T-lymphocyte attenuator	BTLA.CD272	AL3062C	AL3062F	AL3062HV	AL3062S
BCL-2	BCL-2	AL384C	AL384F	AL384HV	AL384S
Beta-secretase 1	BACE1	AL3033C	AL3033F	AL3033HV	AL3033S
Bone morphogenetic protein 7	BMP-7	AL369C	AL369F	AL369HV	AL369S
Breast cancer type 2 susceptibility protein	BRCA2	AL3036C	AL3036F	AL3036HV	AL3036S
β Nerve Growth Factor	PNGF	AL246C	AL246F		AL246S

4.AlphaPlex

Product Description	Part Number	Part Number	Part Number
	500 Assay Points	5,000 Assay Points	100 Assay Points
AlphaPlex ICAM-1 Sm	AP282SM-C	AP282SM-F	AP282SM-HV
AlphaPlex ICAM-1 Tb	AP282TB-C	AP282TB-F	AP282T8-HV
AlphaPlex IFN-y Sm	AP217SM-C	AP217SM-F	AP217SM-HV
AlphaPlex IFN-y Tb	AP217TB-C	AP217TB-F	AP217TB-HV
AlphaPlex IL-1β Sm	AP220SM-C	AP220SM-F	AP220SM-HV
AlphaPlex IL-1β Tb	AP220TB-C	AP220TB-F	AP220TB-HV
AlphaPlex IL-2 Sm	AP221SM-C	AP221SMF	AP221SM-HV
AlphaPlex IL-2 Tb	AP221TB-C	AP221TB-F	AP221TB-HV

5.AlphaLisa

Product Description		Part Number	Part Number	Part Number	Part Number
		500 Assay Points	5,000 Assay Points	100 Assay Points	Standard
Serum Albumin (human)	HSA	AL294C	AL294F		AL294S
Serum Albumin (human) Biotin-Free	HSA	AL363C	AL363F	AL363HV
Serum Albumin (mouse)	Albumin (mouse)	AL508C	AL508F		AL508S
Host Cell Residual DNA	Residual DNA	AL331C	AL331F	AL331HV	AL331S
CHO HCP	CHO Host Cell Protein	AL3176C	AL3176F	AL3176HV	AL3176S

6.AlphaLisa Binding Kit

Product Description	Part Number	Part Number	Part Number
	500 Assay Points	5,000 Assay Points	100 Assay Points
4-1BB/4-1BBL	AL3113C	AL3113F
ACE2/S1 Binding	AL3146C	AL3146F
C1Q Binding Kit	AL3169C	AL3169F	AL3169HV
Cereblon Binding	AL3147C	AL3147F	AL3147S
CD28/CD86	AL3131C	AL3131F
CIAP-BIR2 Binding	AL3166C	AL3166F
CIAP-BIR3 Binding	AL3167C	AL3167F
MDM2 Binding	AL3168C	AL3168F
CTLA4/CD80	AL3046C	AL3046F
CTLA4/CD86	AL3047C	AL3047F

优宁维提供HTRF及Alpha检测全线试剂产品，子公司乐备实（Labex）可提供相关检测全流程实验室服务，欢迎咨询。

三、仪器推荐
PerkinElmer 2017年Q3季度推出的Victor Nivo 多功能微孔板检测仪，具有HTRF专利认证模块及Alpha专利模块。

此外，PE也是HTRF与Alpha技术的专利拥有者，仪器也根据两种检测模式的特点，做了独家优化，能够更好匹配检测试剂盒，优化检测结果。

Victor Nivo作为一款多功能酶标仪也有其独特的产品优势

1.超高载量滤光片——32位滤光片转轮
安全锁定、自动进行波长更换，避免滤光片损耗及丢失。

2.精致体型，灵活应用
在保证实验参数及指标的前提下，做到最大程度的轻量化、精致化，优化实验室空间分布。

3.模块可选配，灵活有弹性
基础功能、高阶功能自由升级选配，适应不同应用场景。

4.HTRF专利认证，
预制程序更好贴合试剂盒检测需求

5.官方建议激光光源Alpha 检测模式，
激发能量、检测强度更优。