抗体结构分析太复杂？FabRICATOR帮你实现定点酶切!

对于抗体结构的质量定量，完整的结构解析包括整体结构分析、亚基水平分析和肽图。其中亚基水平分析在抗体药物结构分析中对设备要求低，分析时间短，且做为QC认证的试验方法，有助于在研发前期理解抗体结构。

Genovis抗体酶切产品可以在亚基水平帮助我们分析抗体片段的结构，获得均匀的Fab和Fc片段。而目前应用较为广泛的胰蛋白酶（Trypsin）、木瓜蛋白酶(papain)和胃蛋白酶（pepsin）切割位点并不专一，特异性差，酶切结果随时间的变化容易造成抗体未被切开或过度消化的结果。因此，Genovis可以帮助您更简单高效的完成抗体结构分析。

 

1.    FabRICATOR

 

FabRICATOR (IdeS)广泛用于表征、质量控制、稳定性测试、生产监测和基于抗体的治疗方法(如单克隆抗体、ADC、生物类似药和Fc -融合蛋白)的克隆选择。该酶可在铰链下方的单个氨基酸位点消化抗体，生成同质F(ab')2和Fc片段。FabRICATOR可以用于消化人IgG1-4，猴、鼠、兔、羊的IgG。 

图1  FabRICATOR酶切原理图

 
图2  FabRICATOR酶切确定抗体质量属性结果

 

除冻干酶外，该酶还可以提供多种产品形式可满足不同的试验需求，帮助您更好的完成试验。

 

① FragIT™ 

 

FragIT旋转柱含有与琼脂糖珠共价偶联的FabRICATOR (IdeS)酶，用于生成F(ab')2和Fc/2片段，而不会对最终的制备产生酶污染。

 

② FragIT™ Kit

 

适用于需要快速方便地消化抗体的应用，或制备无残留酶的Fc融合蛋白，FragIT小柱装填有固定在琼脂糖珠上的FabRICATOR。使用FragIT试剂盒，均匀的F（ab'）2和Fc片段也可以使用CaptureSelect™亲和纯化柱进行分离。 

图3  FragIT™ Kit工作原理图

 

③ FabRICATOR®-HPLC

 

FabRICATOR-HPLC是一种快速柱上消化单克隆抗体的高效液相色谱柱，它将FabRICATOR酶固定在与HPLC兼容的树脂上，用于稳定的，可重复性的柱上抗体消化。FabRICATOR-HPLC色谱柱可以用于标准的LC-MS常规分析；也可以是更先进的配置，例如2D-LC配置；最先进的是将生物反应器与MS连接为一个系统，该系统可以自动化在线进行柱上消化，抗体亚基分析，这将大大减少操作人员时间、样品处理误差，并增加样品通量。

图4 FabRICATOR®-HPLC工作原理图

 

④ FabRICATOR® MagIC

 

FabRICATOR® MagIC 可以用于抗体的自动化平台，如Thermo Scientific™KingFisher™Duo Prime净化系统，或者振动台。适用于手动或自动的基于IgG的生物制剂的常规分析。FabRICATOR MagIC 包含固定在磁性琼脂糖珠上的FabRICATOR酶，支持并行样品制备和多种抗体亚基的分析。

图5  FabRICATOR® MagIC工作原理图

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FabRICATOR, 2000 units	A0-FR1-020
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FabRICATOR-HPLC	A0-FRC-050
FabRICATOR MagIC, 2 ml	A0-FRM-024

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2.FabALACTICA®   

 

FabALACTICA (IgdE)促进了双特异性和多特异性抗体的表征和完整的Fc糖基化分析。它还简化了单价结合、高阶结构、二硫键和铰链区突变抗体的研究。该酶在铰链上方的特定位点消化人IgG1，产生完整和均匀的Fab和Fc片段。
 
图6  FabALACTICA®酶切原理图

 

产品	货号
FabALACTICA, 2000 units	A0-AG1-020
Immobilized FabALACTICA, Microspin 2×0.5 mg	A0-AG6-010
FabALACTICA Fab kit, Microspin 0.5 mg	A2-AFK-005

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3.FabDELLO™   

 

FabDELLO对铰链区突变的抗体(如LALA突变)具有活性，并使中级LC-MS分析能够对铰链区突变抗体的关键质量属性进行表征。能够特异性地在铰链上方的单个位点消化人IgG1，在不需要还原条件的情况下，在两小时内生成完整的Fab和Fc片段。

 
图7 FabDELLO™酶切原理图

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FabDELLO, 8 × 100 units	B1-BD1-008

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4.FabRICATOR®Z  铰链下方  

 

FabRICATOR®Z (IdeZ)是一种半胱氨酸蛋白酶，可在铰链下方的特定位点消化小鼠IgG2a和IgG3，在两小时的孵化后产生生成F(ab')2和Fc片段。
 
图8 FabRICATOR®Z酶切原理图
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FabRICATOR Z, 2000 units	A0-FRZ-020
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FragIT Z kit, Microspin 0.5 mg	A2-FZ2-005

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5.FabULOUS ™

FabULOUS (SpeB)可用于制备的Fab片段可用于亲和性研究、Fab糖基化研究和结构研究。
它可以在铰链上方的特定位点消化人IgG和小鼠、大鼠、山羊、绵羊和兔子的IgG，产生均匀的Fab片段。

 
图9 FabULOUS ™酶切原理图

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FabULOUS, 2000 units	A0-PU1-020
FabULOUS Fab kit, mouse	A1-PFK-020

 

5.GingisKHAN®   

 

GingisKHAN (Kgp)用于用LC-MS表征基于抗体的生物治疗，研究Fc聚糖分析，双特异性抗体，affinity和avidity效应，并识别翻译后修饰。在铰链上方的特定位点消化人IgG1，产生完整和均匀的Fab和Fc片段。

 
图10 GingisKHAN®酶切原理图

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GingisKHAN, 2000 units	B0-GKH-020
GingisKHAN Fab kit	B0-GFK-020

 

6.GlySERIAS™   

 

GlySERIAS是一种独特的酶，可消化富含甘氨酸的融合蛋白连接物，如Gly4Ser和Glyx Sery(GS)以及多甘氨酸(G)连接物。该酶能够分离多功能融合蛋白的各个结构域，以促进特征分析。融合蛋白的亚基水平分析既能降低整个样品的复杂性，又能使结构域具体化。并允许特定领域的识别和翻译后修饰的监测。

 
图11 GlySERIAS™酶切原理图

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