【罗工流式秘籍51】如何避免抗原抗体的非特异性结合

流式实验中，为了让我们的实验更严谨，更好的分辨出阳性信号，我们都会采用各种对照来辅助圈门。

 

这些对照管只能帮助圈门的判断，并不能从本质上解决非特异性的抗体染色背景问题。

那该怎么办呢？

抗原抗体非特异性结合，大部分来源于抗体的保守区域FC端与细胞表面的FC受体（FCR）的结合。

 

 

多数免疫细胞，比如B细胞、单核/巨噬细胞、DC细胞、粒细胞、γδT细胞等，表面都会表达FCR，从而导致假阳性结果：

 

 

所以为了减少非特异性染色，在抗体染色之前，进行FCR阻断是很必要的呢！！

 

下图的结果，未进行FCR和进行FCR阻断，结果形成了明显的差异，也验证了FCR阻断的必要性。

 

 

样本是CD45＋的白细胞，并且排除了死细胞和粘连体（图片来源于流式中文网）

 

组织样本不加FCR阻断影响更是尤其显著

 

那FCR阻断剂怎么去选择呢？罗工给大家总结了以下常用的FCR阻断剂，可根据咱们的样本种属，直接参考选用：

货号	用途	产品名称	规格	备注
564219	减少非特异性染色	Hu Fc Block Pure Fcl.3216	50ug	人的FCR阻断剂
564220	减少非特异性染色	Hu Fc Block Pure Fcl.3216	250ug	人的FCR阻断剂
564765	减少非特异性染色	Hu BD Fc Block NALE FC1.3216	250ug	人的FCR阻断剂（NA/LE级别）
553141	减少非特异性染色	Ms CD16/CD32 Pure 2.4G2	lOOug	小鼠的FCR阻断剂
553140	减少非特异性染色	MsCD16/CD32 NALE 2.4G2	500ug	小鼠的FCR阻断剂
550270	减少非特异性染色	Purified Anti-Rat CD32	lOOug	大鼠的FCR阻断剂
550271	减少非特异性染色	Purified Anti-Rat CD32	500ug	大鼠的FCR阻断剂