【罗工流式秘籍56】如何确定一些陌生荧光素，在流式细胞仪上是否可用？

荧光素

在多色流式实验设计时，荧光素的选择很重要。但我们发现流式仪器的标记荧光名称或厂家提供的检测说明书上写的荧光素并不那么全面。因为品牌的原材料不同，专利限制和荧光素研发等因素影响，我们经常会遇到很多陌生的荧光素名称，那如何去判断，我们自己的流式仪能不能检测这些荧光呢？

 

我们先来了解下荧光素特性，两个特征光谱（nm）：

①激发光谱（Excitation，Ex）：是指能特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的光线，也称为吸收光谱。最大吸收波长，也就是吸收波峰，简称Ex-Max。

②发射光谱（Emission，Em）：是指某一波长激发光引起荧光素发射的一定波长范围内的荧光。最大发射波长，即发射波峰，简称Em-Max。

 

 

再来了解下常规流式仪，检测荧光素的原理：

流式细胞仪的光学系统中，配备了不同的激光器和滤光片，用来激发和收集不同的荧光素信号。 

①激光器：用来给荧光素，提供激发能量。常见的激发光有紫色Violet（405nm），蓝色Blue（488nm），绿色Green（561nm），红色Red（633nm），高配仪器还有紫外光UV（345nm），用来激发荧光素。 

②滤光片：又可以分为长通、短通和带通，用来收集不同范围的发射波长，也就是能够检测不同的荧光素的发射信号，滤光片的设置主要是针对发生光谱中的发射波峰进行设置的。

 

因此，我们平常说配色，需要提供流式细胞仪荧光配置，是要有具体的激发器和滤光片的2个信息，才能判断具体能够检测的荧光通道。

 

下图为例，是405nm激光器下安装的滤光片以及能够检测的荧光素：

 

 

但我们发现，405nm激光器下常用的的荧光素，比如BV系列的荧光素，在流式机器上并没有注明，那配色的时候到底还能不能用BV的染料？下面给大家介绍一种确认的方法：

 

 

我们可以利用BD官方网站的“荧光光谱查看器”（https://www.bdbiosciences.com/zh-cn/resources/bd-spectrum-viewer），来查看其荧光素的激发波长以及滤光片的信息。

 

如上图，只要是荧光素激发波长和发射波长相近，能够被激发器激发，并能够在滤光片接收波长范围内，就都可以检测得到。就比如BV421，其实是可以用V450 or Pacific Blue这个通道检测的。

 

觉得这个比较复杂的话，或者手机端更方便时，还可以通过我们“流式专家”的微信公众号中的荧光光谱查看器进行查询。

 

 

千万不要因为名字不熟悉，而错过很多，又亮，性价比又高的荧光素哦！

 

BD Sirigen系列专利荧光素：BB系列、BUV系列、BV系列、APC-R700, R718，更亮、更稳定、更准确。