【罗工流式秘籍61】荧光补偿从哪里来？

大家在进行流式多色数据分析中，大家总是闻“补偿”色变。那么对于新手小白来说，补偿到底是什么东东呢？它又是如何产生的呢？

说到补偿，我们需要先带大家快速回顾下荧光素的特性和仪器的检测原理，每个荧光素的发光和检测情况，是由激发光谱和发射光谱2个性质共同决定的，详情请看如下回顾:

【罗工流式秘籍56】如何确定一些陌生荧光素，在流式细胞仪上是否可用？

那目前市面上的荧光素是有非常多的种类的，而流式仪可以接收发射光谱检测范围仅400+nm，要容纳如此多种的荧光素波长还是略显拥挤。

传统流式仪检测的只是荧光素发射光谱中最亮的一个区段，而不同荧光素的光谱之间其实是会有部分重叠的，这部分重叠的光谱信号就是补偿产生的主要来源，在我们的流式实验中又被叫做荧光溢漏。

 

 

荧光素补偿产生的原因有以下3种情况：

 

1、荧光素在发射光谱上相邻

 

比如最经典的，大家最耳熟能详的FTIC和PE荧光素，就是因为在发射光谱上是非常相近的，FITC的发射光谱区段过长，很多荧光信号进入了PE荧光素的检测范围。

 

 

2、单体荧光素和对应荧光的复合/串联荧光素

 

同样还是大家非常熟悉的PE荧光素和PE-Cy7荧光素也会存在补偿。通俗地来讲就是两种荧光素的名称部分一致，就一定会存在补偿，再例如APC和APC-CY7，看起来就是“师出同门”，一个为单体染料，一个是复合染料，那么相应地就会产生补偿值。

 

3、发射波长相近的

 

那为什么很多不同激光激发的荧光素之间也有干扰呢，这是因为很多荧光素的激发波谱范围很宽，再非最佳的激光激发下也会有部分能量吸收进而产生发射光，从而对不同激光的发射波长相近的荧光素产生了干扰，不过相对来说干扰一般不会特别大。

 

我们平时在进行较少指标的检测时，推进大家可以尽量“错开”以上介绍的原理相关的荧光通道的同时使用，以减少荧光素之间的互相干扰，省去调补偿的麻烦，还可以达到最优的实验结果。

 

那如果是多色流式实验，指标非常多，荧光素通道实在没有办法避开补偿怎么办呢？

可以直接联系我们优宁维的流式团队获取免费的流式配色方案，我们流式团队有丰富的配色经验，配色时会尽量选择一些与其他通道补偿较小，荧光较亮的荧光素进行搭配，比如BD品牌专利Sirigen系列（简称BV系列）的新型专利荧光染料，够亮，够稳定，补偿够小，用过的人都说好！