【罗工流式秘籍75】Flowjo——Backgating功能的巧用

Q:罗工罗工，帮我看看这个组织样本的流式结果图，跟血液和脾脏的图差好多啊，弥散的一大片，我在FSC/SSC的图上不知道到底应该圈哪儿好了，都圈上么？

Q:我记得之前看咱的讲座视频，是要在圈主群体的时候，尽量不圈左下角的细胞碎片和仪器的信噪音来的，可是我不知道应该从哪里界定，而且我也试了下，后续圈门的百分比，还是受我这个图圈门位置的一定影响的，不敢乱圈。

Q:而且你看图上还提示我11%的细胞跑出边缘了，我是不是上机的时候FSC/SSC电压设置的也不合适啊？

罗工：这个根据我的经验来看呢，其实左下角的碎片信号和严重的死细胞和黏连细胞从这个图上能看出些细胞形态的，大致分在这个位置

罗工：要是说严格的，有依据点的话，给你介绍个Layout图片编辑器中的一个小工具。

罗工：咱分析的不是组织样本里的免疫细胞么，刚你也说后续圈门逻辑啥的都圈好门了，那你把CD45+死活-的那群门内的细胞图打开，并拖动到Layout里，右键点击图片，选中里面的“Backgating”

Q:这样对么？

罗工：对的

图片
Q:哦哦，弹出了一个这样的前面圈门的流程界面，这个我要怎么看呢？

罗工：你看，里面红色的就代表你当前，所圈的这个门内的细胞的所在位置了，从这个图你再回看你的第一张FSC/SSC的图，就能看出来，左边费目的细胞，差不多就在刚才我大致截图给你的那个分割位置。

罗工：然后压线跑出边界的细胞，也都不是咱的免疫细胞，跑出去就跑出去了，不影响目的细胞百分比的显示，你电压设置的没啥问题，不用重新调哈。

Q:好的好的，我明白该怎么搞了，感谢罗工~