【罗工流式宝典第10式】Th亚型区分，并非细胞因子marker不可

辅助T细胞（Th）是为免疫系统的其他细胞提供辅助功能，特别是抗原呈递细胞（APCs，如巨噬细胞、树突状细胞和B细胞），并对这些细胞的活化和成熟起到重要的作用的细胞群体，比如Th1/Th2/Th17/Treg等亚群，最经典的流式检测分群，通常都是检测它们分泌的细胞因子来做鉴定分析的。
 

但困难也就随之而来了，首先细胞因子位于细胞膜内，需要固定破膜才可以检测得到；其次细胞因子在细胞静息期或者轻度炎症下分泌量非常微小，很难检测到，需要额外对细胞进行体外刺激和因子分泌阻断处理来提高检出率；另外细胞因子往往很不稳定，容易受外界处理不当而降解，如样本数量过大，样本制备活性不好，或不适当的固定破膜试剂等影响。

因此为了避免刺激效果不好，体外培养不当，实验处理复杂等因素对实验检出结果的影响，很多科学家会为了简化Th亚群的检测难度，使用对应细胞亚群的表面标志物或核内标志物进行检测，详见如下汇总表：

表面指标鉴定Th分型

核内指标鉴定Th分型
 

以Th1/2/17群体为例，详细列举细胞因子外的标记物检测意义：
 
Th1：
在Th1分化中起关键作用的两种细胞因子是IFNγ和IL-12。分泌的IL-12能活化STAT4转录因子从而促进Th细胞分化为Th1效应细胞。而STAT4能活化转录因子STAT1和Tbet促进IFNγ产生。Tbet被认为是Th1分化的主要调节因子，因为它诱导更多的IFNγ表达，形成增强Th1反应的正反馈环；下表为促进Th1细胞发育的基因表达和细胞因子变化：

	Th1细胞
促进发育的细胞因子	IL-12、IFNγ
转录因子和信号转导蛋白	Tbet、STAT1、STAT4
细胞表面标志物	Fas、FasL（类型1）
	CD119 （IFNγR1）、CD183 （CXCR3）
	CD186 （CXCR6）、CD191 （CCR1）
	CD195 （CCR5）、CD212 （IL-12Rβ1）
	CD218a （IL-18Rα）（小鼠，非人类）
	CD254 （RANKL）CD366 （TIM3）
分泌的细胞因子	IFNγ、TNFα、GM-CSF、IL3、LTα、
	LTβ、CXCR3、CCL2、IL2、IL10

Th2：
Th2细胞介导针对细胞外寄生虫、细菌、过敏原和毒素的体液或抗体介导的免疫反应的活化和维持；下表为Th2细胞发育的基因表达和细胞因子变化：

 

_	Th2细胞
转录因子和信号转导蛋白	GATA-3、BATF、IRF4、STAT6
细胞表面标志物	CD184 (CXCR4)、CD194 (CCR4)
	CD198 (CCR8)、CD294 (CRTh2)
	CD365 (TIM1)、IL-25R（IL-17RB）
	IL-33R（ST2）
分泌的细胞因子	IL-4、IL-5
	IL-10 (小鼠)、IL-13

Th17：
从外周血、组织和肿瘤中分离细胞用流式细胞分析已被广泛用于研究Th17的生物学和功能。流式细胞术对Th17细胞的分型通常依赖于关键效应细胞因子（如IL-17A）或转录主要调节因子；下表为Th17细胞发育的基因表达和细胞因子变化：

 

_	Th17细胞
转录因子和信号转导蛋白	BATF、c-Maf、IRF4
	RORα、RORγt
细胞表面标志物	CD39 (人样)、CD121a
	CD161 (人样) 、CD194 (CCR4)
	CD196 (CCR6)、CD360 (IL-21R)
	CD212 (IL-12Rβ1)、IL-23R
分泌的细胞因子	GM-CSF、IL-17A、
	IL-17AF、IL-17F
	IL-21、IL-22

 
参考文献：
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