优宁维携手ToloBio提供全球领先的基于CRISPR诊断技术的整体解决方案
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吐露港(ToloBio)生物科技有限公司首次发现 CRISPR-Cas12蛋白具备高效的“反式切割活性”,并基于该酶的独特优势研发了“福尔摩斯/HOLMES”核酸快速检测平台技术(one-Hour Low-cost Multipurpose highly Efficient System)。相比于传统的分子诊断技术,基于CRISPR的HOLMES技术具备高灵敏、高特异、快速便捷等优势,被《Science》杂志誉为“下一代分子诊断技术”,在病原菌检测、遗传疾病筛查、精准医疗等众多领域有很大的应用潜力。
Cas12a
HOLMES检测平台[1]
- Cas12a家族是一类由单个crRNA介导的核酸内切酶
- 在HOLMES核酸检测系统中,Cas12a: crRNA: 靶标DNA分子三元复合物的形成会激活Cas12a的反式剪切活性,可无差别的剪切反应体系中的ssDNA分子,包括荧光标记的ssDNA探针,从而产生大量的荧光信号,指示检测结果为阳性
产品名称 | 规格 | 货号 | 应用 |
LbCas12a(Cpf1) Nuclease | 100 pmol | 32108-01 | 不仅可用于体外dsDNA的特异剪切,也可用于靶标核酸的快速检测,详见HOLMES核酸快检技术[1] |
1000 pmol | 32108-03 |
Cas12b
HOLMESv2检测平台[2]: 率先实现“一管法”和“绝对定量”
- 采用嗜热菌来源的Cas12b,比Cas12a更加耐热,使核酸扩增与靶标检测在同一管中进行
- Cas12b: crRNA: 靶标DNA三元复合物会激活Cas12b的反式剪切活性, 可无差别剪切反应中的ssDNA分子,包括荧光标记的ssDNA探针,从而产生大量的荧光信号,指示检测结果为阳性
- “一管法”体系既能保持对SNP和甲基化位点的分辨能力,又有效地避免气溶胶污染的风险,同时缩短检测耗时
- 通过结合HOLMESv2与digital PCR体系,可实现对靶标核酸的绝对定量
产品名称 | 规格 | 货号 | 应用 |
AapCas12b(C2c1) Nuclease | 100 pmol | 32118-01 | 最佳反应温度为60℃,可与LAMP恒温扩增联用,实现一步法CRISPR检测体系,详见HOLMESv2核酸快检技术[2] |
1000 pmol | 32118-03 |
Cas13a
ToloBio拥有Cas12核酸检测的方法学专利,并在2020年与美国科学院院士张锋教授领衔创立的Sherlock Biosciences就Cas12和Cas13诊断技术达成了中美市场的“专利交叉授权”合作。2022年11月,双方又进一步签署了全球范围内的CRISPR诊断“专利交叉授权”合作协议,完成了ToloBio在CRISPR检测领域方法学专利的全面布局。
HOLMES与SHERLOCK“双剑合璧”[3]
- Cas13家族是一类由crRNA单独介导的核酸内切酶,可特异地识别并剪切靶标ssRNA
- Cas13与crRNA、靶标RNA形成三元复合物后,激活针对非特异序列ssRNA的“反式剪切活性”,将体系中的ssRNA切碎
- 靶标RNA浓度越高,体系反式剪切ssRNA报告探针的速度更快,释放荧光信号到达平台期的时间越短
产品名称 | 规格 | 货号 | 应用 |
LwaCas13a(C2c2) Nuclease | 100 pmol | 32117-01 | 反式剪切RNA报告探针,可用于开发靶标核酸的快速检测试剂盒 |
1000 pmol | 32117-03 |
Cas12f
不同靶ssDNA存在时,Cas12f1行使高效反式剪切活性的荧光信号结果
- Cas12f核酸酶是依赖sgRNA介导的内切核酸酶,倾向于特异结合并剪切靶标ssDNA,且无需PAM位点
- Cas12f蛋白分子量普遍较小(约61.5kD),这是其主要优势之一
- 与Cas12a/b功能类似,已有文献报道,Cas12f对ssDNA靶标中SNP位点的分辨能力高于Cas12[4]。
产品名称 | 规格 | 货号 | 应用 |
Un1Cas12f1(Cas14a1) Nuclease | 100 pmol | 32119-01 | 与Cas12a/b功能类似,Cas12f也可用于靶标核酸的快速检测 |
1000 pmol | 32119-03 |
CRISPR-Dx的优势
- 多重:联检/降本;微流控/盘式芯片;色码CARMEN;体系多重
- 绝对定量:液相微球/固态微孔
- 超灵敏/特异:1-2个拷贝可测;识别PCR灰区、SNP位点、甲基化位点
- 超快速:1-5min内完成剪切;恒温扩增;One-Step;免扩增;免提取核酸
- POCT/全自动:LFA;LDT;全流程自动化;便捷/成本低
其他CRISPR-Dx产品
品名 | 货号 | 规格 |
AsCas12a(Cpf1) | 32104-01 | 100 pmol |
32104-03 | 1000 pmol | |
AacCas12b(C2c1) | 32116-01 | 100 pmol |
32116-03 | 1000 pmol | |
FnCas12a(Cpf1) | 32106-01 | 100 pmol |
32106-03 | 1000 pmol | |
Lb5Cas12a(Cpf1) | 32110-01 | 100 pmol |
32110-03 | 1000 pmol | |
SpCas9 | 32101-01 | 100 pmol |
32101-03 | 1000 pmol | |
Sp-dCas9 | 32102-01 | 100 pmol |
32102-03 | 1000 pmol |
Cas Protein表达质粒
品名 | 货号 | 规格 |
pET28TEV-AsCas12a | 92104 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-AsCas12a-NLS | 92105 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-FnCas12a | 92106 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-FnCas12a-NLS | 92107 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-LbCas12a | 92108 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-LbCas12a-NLS | 92109 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-Lb5Cas12a | 92110 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-BbCas12a | 92111 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-BoCas12a | 92112 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-HkCas12a | 92113 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-OsCas12a | 92114 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-TsCas12a | 92115 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-AacCas12b | 92116 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-LwaCas13a | 92117 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-AapCas12b | 92118 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-Un1Cas12f1 (Cas14a1) | 92119 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
pET28TEV-Lb4Cas12a | 92120 | 1 g (20uL, 50 ng/L) |
CRSIPR体系反式剪切报告探针
品名 | 货号 | 规格 |
HOLMES ssDNA reporter (FAM) | 31101 | 10 nmol powder |
HOLMES ssRNA reporter (FAM) | 31111 | 10 nmol powder |
Reference:
[1] Li S, Cheng Q, Wang J, et al. CRISPR-Cas12a-assisted nucleic acid detection[J]. Cell Discovery. 2018, 4: 20.
[2] Li L, Li S, Wu N, et al. HOLMESv2: A CRISPR-Cas12b-Assisted Platform for Nucleic Acid Detection and DNA Methylation Quantitation[J]. ACS Synthetic Biology. 2019, 8(10): 2228-2237.
[3] Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Lee JW, et al. Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2. Science. 2017;356(6336):438-442.
[4] Harrington LB, Burstein D, Chen JS, et al. Programmed DNA destruction by miniature CRISPR-Cas14 enzymes. Science. 2018;362(6416):839-842.
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