1、终点法检测细胞杀伤--应用场景ADCC,CAR-T,CAR-NK等。
靶细胞与BATDA共孵育,BATDA进入细胞后,被内酯酶裂解形成TDA,亲水性的TDA不能再穿过细胞膜屏障。与效应细胞共孵育,启动杀伤效应将靶细胞中的TDA释放到上清液中,然后将其转移到检测板上,并化合物溶液结合生成荧光分子EuTDA。细胞裂解导致EuTDA的增加,因此信号的增加与标记的靶细胞群的细胞死亡相关。
优势:与51Cr 释放法的平行性最好R2>0.9,唯一一种灵敏度可与51Cr 媲美的检测方法。作用时间明显缩短,可重复性高,对悬浮靶细胞和贴壁型靶细胞均具有很好的适用性。可重复性好,可以满足免疫细胞体外杀伤效力检测的需要。
2、荧光素酶报告基因检测--应用场景:ADCC,CAR-T/CAR-NK,中和抗体检测(疫苗)等
萤火虫荧光素酶在镁离子存在的情况下,催化荧光素底物与ATP、O2反应后发生的生物化学发光。作为观察基因表达变化的高灵敏度方法沿用至今。将目标转录调控区域与荧光素酶基因进行融合并导入细胞,然后对细胞进行刺激/处理,通过检测表达的荧光素酶促成的发光可测定目标转录调控区域的活性。
优势:①高灵敏度:亚飞摩尔到飞摩尔检测水平的高灵敏度。
②无需洗涤:Mix&Measure均相检测技术使操作更简单且易于实现自动化。
③长时间发光:发光信号持续时间长,可进行连续处理或批量处理。
④稳定性高:2-8℃冷藏保存。
⑤不含DTT:不含类似DTT的硫醇类化合物。
3、ATP变量检测细胞活力/增殖/毒性
ATP(三磷酸腺苷)是广泛存在于活细胞中的标志性能量物质,对其监测可用于评估多种药物、生物反应修饰剂和生物化合物的杀细胞、细胞抑制和增殖作用。
优势:①灵敏度高,可检测低至20个细胞。
②稳定性高:2-8℃冷藏保存。
③无需洗涤:Mix&Measure
④不含DTT:不含类似DTT的硫醇类化合物。
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