CRISPR KO Total Solution | 如何快速定位适合您的guide RNA？

增强基因敲除信心

Dharmacon Edit-R CRISPR系列guide RNA是经验证的算法设计的，可实现高特异性的功能基因敲除，因此您可以对敲除结果充满信心。

 

适应多种工作流程的灵活性

A. DNA-free体系：合成sgRNA或crRNA: tracrRNA，搭配Cas9蛋白或mRNA

B. Lentiviral sgRNA：慢病毒质粒载体形式，更适合无法化转/电转的难转染细胞

C. Lentiviral All-in-one sgRNA: 单个试剂即可完成基因敲除

 

如何选择合适的gRNA？

根据您的实验应用及细胞类型，选择合适的gRNA，可参考下表：

*仅用于S. pyogenes Cas9的定制载体设计

	Synthetic crRNA	Synthetic sgRNA	Lentiviral sgRNA	Lentiviral All-in-one sgRNA
保证靶基因的正确编辑	√	√	√	√
可以为任何物种，核酸酶或编辑位置提供定制设计	√	√	√*	√*
RNP体系兼容电转	√	√
转导进无法化转/电转的难转染细胞			√	√
抗生素标记筛选细胞			√	√
荧光标记筛选细胞	√**	√**
单试剂工作流程				√

**需搭配荧光Cas9 mRNA共转染

 

为什么更推荐DNA-free体系？

1.DNA-free体系定义： CRISPR-Cas9体系中不含任何DNA载体形式组分，可通过化学转染、显微注射或电转进行编辑

（1）全RNA体系：sgRNA+Cas9 mRNA; crRNA: tracrRNA+Cas9 mRNA

（2）RNP体系：sgRNA+Cas9 蛋白; crRNA: tracrRNA+Cas9 蛋白

2.DNA-free体系优势：

（1）编辑效率更高：特殊设计算法、Dharmacon专利2’-ACE化学修饰^[1]保证更高的编辑效率。

 

（2）脱靶效应更低：Dharmacon CRISPR特异性分析工具不仅可以识别多个错配，还能够识别RNA和DNA序列间隙进行脱靶认证，最终投放效果最好的sgRNA/crRNA到产品中，

有效降低脱靶效应^[2]。

 

 

（3）安全性更高：瞬时表达、无DNA整合风险、无启动子兼容问题。

 

（4）简便性更强：即买即用，无需构建质粒载体和病毒级实验环境，一步转染，显著缩短实验周期。

 

（5）支持多靶点编辑：可通过转染多条sgRNA/crRNA对细胞多个靶点进行编辑，无需构建多靶点载体。

（6）支持CRISPR快速筛选：阵列形式sgRNA/crRNA文库，是大规模文库筛选的理想选择。

 

好物推荐

货号	品名	规格	应用
CAS12205	Cas9 nuclease protein NLS	100/500ug	纯化好的Cas9蛋白用于与合成gRNA的共转染
CAS11860	Cas9 nuclease mRNA	20/100/500ug	纯化好的Cas9 mRNA用于与合成gRNA的共转染
CAS11229	Lentiviral Cas9 nuclease reagents - Plasmid DNA	10ug	纯化好的Cas9慢病毒质粒载体，用于构建稳定表达Cas9的细胞系
SQ-003000-01-0002	Edit-R CRISPR (knockout) Human AKT1 Synthetic sgRNA	2nmol	合成sgRNA
CM-003000-01-0002	Edit-R CRISPR (knockout) Human AKT1 crRNA	2nmol	合成crRNA，需搭配tracrRNA一起使用
U-002005-05	Edit-R tracrRNA	5nmol	合成tracrRNA，需搭配crRNA一起使用
GSGH11841-EG207	Edit-R CRISPR (knockout) Human AKT1 Lentiviral sgRNA	甘油菌克隆	可包装成慢病毒，转导无法化转/电转的难转染细胞，构建稳转细胞系
GSGH11938-16EG207	Edit-R All-in-one Lentiviral (knockout) Human AKT1 sgRNA	甘油菌克隆	sgRNA, Cas9构建至一个载体上，单一试剂完成基因编辑

 

表格中对应Horizon官网链接：

1.https://horizondiscovery.com/en/gene-editing/gene-editing-reagents/products/cas9-nuclease-protein-nls

2.https://horizondiscovery.com/en/gene-editing/gene-editing-reagents/products/cas9-nuclease-mrna

3.https://horizondiscovery.com/en/gene-editing/gene-editing-reagents/products/lentiviral-cas9-nuclease-reagents

4.https://horizondiscovery.com/en/gene-editing/gene-editing-reagents/products/edit-r-predesigned-synthetic-sgrna?nodeid=entrezgene-207

5.https://horizondiscovery.com/en/gene-editing/gene-editing-reagents/products/edit-r-predesigned-synthetic-crrna?nodeid=entrezgene-207

6.https://horizondiscovery.com/en/gene-editing/gene-editing-reagents/products/edit-r-tracrrna

7.https://horizondiscovery.com/en/gene-editing/gene-editing-reagents/products/edit-r-predesigned-lentiviral-sgrna?nodeid=entrezgene-207#resources

8.https://horizondiscovery.com/en/gene-editing/gene-editing-reagents/products/edit-r-predesigned-all-in-one-lentiviral-sgrna?nodeid=entrezgene-207

 

Reference

[1] Scaringe, S.A. et al., Novel RNA synthesis method using 5´-silyl-2´-orthoester protecting groups. J. Am. Chem. Soc. 120:11820-11821 (1998).

[2] E.M. Anderson, A. Haupt, et al., Systematic analysis of CRISPR-Cas9 mismatch tolerance reveals low levels of off-target activity. J. Biotechnol. 211, 56-65 (2015).