HaCaT细胞培养攻略

HaCaT细胞是人类永生化表皮细胞，由角质形成细胞培育而来的，保留了角质形成细胞分化能力，是非肿瘤来源的人正常皮肤永生化角质形成细胞株，与正常人角质形成细胞分化特性相似，可以繁殖150代以上，但不是肿瘤细胞，不具有肿瘤特性。

 

细胞名称	HaCaT（人永生化角质形成细胞）
细胞来源	一位 62 岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤
形态	上皮细胞样
生长特性	贴壁生长
营养体系	89%MEM（abs9503）+10%胎牛血清优级（abs972）+ 1%双抗（abs9244）+0.2%牛脑垂体提取物（abs9119）
传代	1:3—1:5，传代周期2-3天
冻存	无血清细胞冻存液plus（abs9478）/ 90%完全培养液+10%DMSO
应用	皮肤生物学和分化研究

 

 

该细胞较难消化，胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ，含酚红（abs47014938）消化5min作用，有时可能高达10min，主要由于细胞不同分化程度和融合度而异。注意消化前一定要用PBS清洗细胞2-3次，铺板时一定要均匀，因为HaCat成片生长，铺板不匀会存在局部生长过密难以消化，生长稀疏部分容易消化过度的情况。

图a低Ca²⁺条件下HaCat细胞基础状态和图b高Ca²⁺条件下HaCat细胞分化状态

 

10%FBS培养体系中的 Ca²⁺足以诱导该细胞分化，也就是说，正常培养体系下，该细胞会逐渐分化，分化前细胞近纺锤形，排列较松散，分化后细胞向立方体发展，排列紧密，呈片状生长。

低钙离子条件下，HaCat增殖更快，K14的表达仅限于表皮基底层，而K10和总合蛋白的存在表明表型分化程度更高。通过免疫荧光实验证实了HaCat细胞分化表型的获得，与第6天相比，分化标记K10在HaCaT细胞中的表达在第14天显著增加，几乎100%的细胞是阳性的，这可能和细胞密度有关。

牛脑垂体物常用作无血清细胞培养的生长补充剂，可促进上皮细胞、内皮细胞和黑色素细胞增殖，广泛用作各种上皮细胞和黑色素细胞培养中的补充剂。此外，其具有抗氧化能力，可对抗过氧化氢诱导的细胞坏死，蛋白质氧化，膜破碎和DNA损伤。

 

Absin胞胞巴适本期推荐产品

货号	品名	规格
abs9119	牛脑垂体提取物	20mg/20mg*5
abs972	胎牛血清(优级)	500mL
abs9503	MEM培养基（含NEAA，含L-谷氨酰胺，不含丙酮酸钠，含HEPES）	500mL
abs9244	青霉素-链霉素溶液(100×双抗)	100mL
abs9478	无血清细胞冻存液plus	100mL

 

参考文献

1.Wilson VG. Growth and differentiation of HaCaT keratinocytes. Methods Mol Biol. 2014;1195:33-41. doi: 10.1007/7651_2013_42. PMID: 24155234.

2.Colombo I, Sangiovanni E, Maggio R, et al. HaCaT Cells as a Reliable In Vitro Differentiation Model to Dissect the Inflammatory/Repair Response of Human Keratinocytes. Mediators Inflamm. 2017;2017:7435621. doi:10.1155/2017/7435621

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