一招搞定T, NK, iPSC&3D spheroids RNAi

在之前的推文中有和大家介绍过Accell siRNA，一款不需要借助任何转染试剂、可自行进入细胞发挥作用的特殊siRNA，且可在几乎所有细胞类型中成功递送，保持细胞活力的同时，确保靶向基因的敲低效率。

今天，我们带着新鲜出炉的实验数据，再次展现Accell siRNA在复杂模型中的递送能力。

 

Accell siRNA是复杂模型的理想载体
1. 在很多模型中进行有效的特异性靶点敲低，其中包括
●常见癌症细胞系
●人的原代T细胞、NK细胞
●人的诱导多功能性干细胞（iPSC），iPS来源的神经元
●3D肿瘤细胞球
2. 无需借助转染试剂即可成功递送
3. 始终维持较好的细胞活性
4. 适合在复杂细胞模型中进行高通量阵列基因筛选

 

一步法操作，简单便捷

 

 在不同的细胞系以及激活的T细胞中也可驱动强有力的基因敲低，同时不影响细胞活性

 

人的原代NK细胞
1. 文献支持：
研究人类自然杀伤（NK）细胞中的基因功能对于推进NK细胞生物学的理解至关重要，有望为改善NK细胞疗法铺平道路。然而，NK细胞难以操作，传统电穿孔、脂质体转染或病毒转导方式受递送效率不稳定、细胞活力下降的影响。因此，Accell siRNA的应用价值更加凸显，他可自行进入NK细胞，轻松完成NK细胞功能性基因分析。在这个过程中，无血清Accell siRNA递送培养基可强烈促进siRNA的吸收，也可添加低浓度的重组人IL-15作为促生长因子，且不会损害NK细胞的活力^[1]。

 

实验操作流程示意图

 

Accell B2M siRNA处理CD3- CD56+ NK细胞后，β2m和HLA平均荧光强度

 

iPSC, iPS-neurons 
1. 在诱导多功能干细胞中驱动有效基因敲低，同时不影响细胞活力

 

 

2. 神经元分化：
●神经元是有丝分裂后的细胞：难以构建细胞系
●分化产生异质细胞群：许多不同的神经元亚群
●受限的递送方法：在调控基因表达方面具有挑战

 

实验操作流程示意图
 

3. 文献支持：
MAP4K4是促丝裂原活化蛋白激酶家族中的一员，使用Accell siRNA作用IPS-神经元，抑制MAP4K4的表达，从而增加神经突的长度^[2]。

 

Accell siRNA成功敲低IPS-神经元中的MAP4K4的表达

MAP4K4敲低的细胞，神经突的长度显著增加

 

3D肿瘤细胞球模型
1. 使用Accell siRNA在无基质胶的肿瘤细胞球模型中进行靶向基因的敲低：在HCT-116, LS174T中进行PPIB敲低，qPCR和WB验证结果如下：

 

实验操作流程示意图

在低血清培养基、Accell专用培养基中均能发挥较好基因敲低效果

 

2. 使用Accell siRNA在基质胶包埋的肿瘤细胞球模型中进行靶向基因的敲低：

 

实验操作流程示意图

可通过补加Accell siRNA延长基因敲低作用时效

3. 可同时在3D肿瘤细胞球中进行多个基因敲低：
●高达80%靶向基因的敲低
●多基因敲低和单基因敲低一样高效
●即使是序列同源性很高的基因，也能最小化非靶向基因的敲低

 

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货号	品名	规格
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D-001910-10-05	Accell Non-targeting Pool	5nmol
D-001930-10-05	Accell GAPD Control Pool	5nmol
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B-003000-WB-100	Molecular Grade RNase-free water	100mL
abs9495	基质胶（低因子，无酚红）	1.5mL*8
130-095-762	Human IL-15, premium gr.	10ug
130-092-657	NK Cell Isolation Kit, human	EA
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612767	BUV737 Mouse Anti-Human CD56(NCAM16.2)	25T
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A07749	CD3-PC5	100T
554655	Fixation Buffer	100mL
400119	APC Mouse IgG1, κ isotype Ctrl	25ug
400107	FITC Mouse IgG1, κ isotype Ctrl	50ug
316312	APC anti-human β2-microglobulin	100T
311404	FITC anti-human HLA-A,B,C	100T

   

Reference:
[1] Momayyezi P, Malmberg KJ, Hammer Q. Small Interfering RNA Delivery Into Primary Human Natural Killer Cells for Functional Gene Analyses. Curr Protoc. 2022;2(11):e613. doi:10.1002/cpz1.613
[2] Wu C, Watts ME, Rubin LL. MAP4K4 Activation Mediates Motor Neuron Degeneration in Amyotrophic Lateral Sclerosis. Cell Rep. 2019;26(5):1143-1156.e5. doi:10.1016/j.celrep.2019.01.019