明星产品top 1：高分文献实验中的基础磐石

闪亮请出我们的RNeasy Mini Kit（74104，Qiagen），正是它对实验样本RNA的高质量提取，为我们的实验打下坚实的基础前提，奠定了咱们高分文章的酝酿到来！让我们浅浅的了解一下它吧！

路人：报上名来，啥条件呀？这么狂？

明星产品top 1：名字：RNeasy Mini Kit；代号（货号：74104）

路人：你能干啥呀？说说看？

明星产品top 1：我可以在几分钟内即可获得高质量的总RNA；并且任何下游应用中实现高性能；你样本量大小无所谓，或者即使样本比较特殊也可以，我都能得到一致的RNA产量。

路人：哎呀，小子有点东西！那你举个例子你干过啥？

明星产品top 1：请看VCR！噢，错了，请看下面讲解！

 

参与案例1^【1】：

VIvi姐跟着刘畊宏锻炼肉眼可见的瘦了！久坐导致死臀综合征？60天我减掉了半个自己！起初我以为只是简单的摔了一跤，结果确诊为脆皮大学生！

 

 

铺天盖地的新闻印入我的眼帘，吓得“我”，拿起手机滑了几下屏幕 / 急的在客厅转了一圈 / 第一时间起来扭下腰 / 收藏一堆运动视频 / 转身下单运动装备，完成了今天的运动打卡KPI。大家好，我是你们的老朋友：小优。

不知道大家是不是动了起来，反正我是已经开始练起了八段锦，打开了刘畊宏的直播间，办了从来不去的健身卡，从心理上给自己创造了最大的满足感！不知道我的一系列操作是否击中了屏幕前你？

啰嗦的话已经说完了，咱们聊点正事吧，不知道大家多久没有体检了？印象最深的是在我前两年的某次体检中，我作为一个确实不瘦的小胖子，毫无疑问的体检单子上写着：轻度脂肪肝，体脂率高，高尿酸，血糖高等一系列让人担惊受怕的检查数据！

当然，不一定非要肥胖才会有健康问题，现在很多人过着吃不尽的外卖，加不完的班，熬了又熬的夜，改了无数遍的论文/项目书，刷不停的短视频/小说，这种久坐不动的生活方式，导致动脉粥样硬化及其并发症的患者人数不断增加。

2019年美国马萨诸塞州波士顿哈佛医学院麻省总医院放射科系统生物学中心等发表在NATURE MEDICINE（影响因子：82.9）的一篇文章：Exercise reduces inflammatory cell production and cardiovascular inflammation via instruction of hematopoietic progenitor cells（运动通过指导造血祖细胞减少炎症细胞生成和心血管炎症），做了一个关于运动是否会影响白细胞生成的探索，最终得出结论：通过体育锻炼，可向基质造血骨髓龛发出的瘦素信号减少，通过调节造血干细胞和祖细胞 （HSPC）的生态位来改变它们，减少了炎性白细胞的慢性造血输出从而预防心血管疾病。

在实验中，作者用（74104，RNeasy Mini Kit）提取了实验组织中的RNA做Q-PCR实验，作为后续的研究准备。剧透到这里，具体的大家可以点击下方图片进入阅读哟~

 

 

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6858591/

 

 

扩展数据 图 2. 运动 6 周后干细胞和祖细胞静止期延长。

小鼠腹腔注射5-溴-2-脱氧尿苷（BrdU）（1毫克）。(a) 长期造血干细胞（LT-HSC）、短期造血干细胞（STHSC）中的 BrdU；(b) 普通髓系祖细胞（CMP，***p=0.00026）、巨核细胞红系祖细胞（MEP，***p=1.028×10^-5）、粒细胞巨噬细胞祖细胞（GMP，***p=4.17×10^-4，所有n=14只动物为静坐，n=15只动物为运动）、巨噬细胞和树突状细胞祖细胞（MDP，***p=0. 0070，每组 n=7 只动物）和 B 细胞祖细胞（B 细胞祖细胞，**p=0.0065，每组 n=6 只动物）在 22 小时后进行分析（对 CMP、MDP 和 B 细胞祖细胞进行双尾曼惠尼 U 检验；对 MEP 和 GMP 进行双尾学生 t 检验）。(c）造血祖细胞的流式细胞仪分选和 BrdU 分选的代表性流式细胞仪图。(d）通过 Ki-67/ DAPI 染色评估 LSK 的细胞周期分析。Ki67⁺ LSK 的代表性流式细胞仪点阵图（*p=0.038，静坐动物 n=7，运动动物 n=12，2 个独立实验，双尾 Mann-Whitney U 检验）。(e）BrdU脉冲追逐实验概要。小鼠在运动 3 周前在饮用水中摄入 BrdU 3 周（基线，n=3 只）。(f）BrdU掺入LT-造血干细胞、ST-造血干细胞、多能祖细胞（MPP，**p=0.0074）、CMP（p=0.14）、MEP（*p=0.034）和GMP（p=0.07，静坐时n=9只动物，运动时n=4只动物，比较静坐和运动的双尾曼-惠特尼U检验）。(g）久坐和跑步小鼠粒细胞巨噬细胞集落的代表性图像。(h）骨髓单核细胞（BMNCs）完整集落的骨髓集落形成单位检测（CFU）（*p=0.036，每组 n=6 只动物，2 个独立实验，双尾曼-惠特尼 U 检验）。(i）静坐和运动小鼠每只股骨的 HSPC 数量（每组 n=15 只）。(j) Zeitgeber 13 时的骨髓白细胞数量：B 细胞（**p=0.0089）、CD4 T 细胞、CD8 T 细胞（*p=0.048）、中性粒细胞（*p=0.044）、单核细胞（*p=0.041）、嗜酸性粒细胞（*p=0.019，静止时 n=5 只动物，运动时 n=6 只动物）和 NK 细胞（**p=0.00099，每组 n=3 只动物，双尾曼-惠特尼 U 检验）。(k）血小板数（*p=0.016，双尾学生 t 检验）、红细胞数（RBC）、血红蛋白数（HGB）和血细胞比容数（HCT，静止时 n=12 只动物，运动时 n=11 只动物，4 次独立实验）。数据为平均值 ± s.e.m。

 

参与案例2^【2】：

在现今这个繁华的世界里，生活节奏快速，经济蓬勃发展，但随之而来的是不规律的生活方式、快餐文化主导的饮食习惯，以及超负荷的精神压力。这些因素都为癌症的发生创造了条件。KRAS 是癌症中最常见的突变蛋白之一，几十年来，人们一直在努力研究直接抑制它的功能。

2023年美国纽约州纽约市纪念斯隆-凯特琳癌症中心人类肿瘤学和发病机制项目及美国纽约斯隆凯特琳纪念癌症中心医学部等在Nature（影响因子：64.8）发表的一篇文章：Pan-KRAS inhibitor disables oncogenic signalling and tumour growth（泛 KRAS 抑制剂抑制致癌信号传导和肿瘤生长），在此文章中指出：共价等位基因特异性抑制剂能将 KRAS G12C 陷于非活性构象，并抑制患者的肿瘤生长。非活性状态选择性抑制是否可用于治疗非 G12C KRAS 突变体仍在研究中。在此，作者报告了一种非共价抑制剂的发现和特性，它能以高亲和力优先结合 KRAS 的非活性状态，同时不影响 NRAS 和 HRAS。最终研究表明，大多数 KRAS 癌症蛋白在癌细胞中的活性状态和非活性状态之间循环，并依赖核苷酸交换来激活。泛 KRAS 抑制剂（本文所述的抑制剂）具有广泛的治疗意义，值得对 KRAS 驱动的癌症患者进行临床研究。

其中在RNA-seq实验中，HEK293 (WT), MRC5 (WT), MRC9 (WT), PC9 (UAWT), HCC827 (UAWT), H1650 (UAWT), H358 (G12C), H2122 (G12C)、 CALU1（G12C），MIAPACA2（G12C），LS513（G12D），HPAC（G12D），ASPC1（G12D），PANC1（G12D），PANC0403（G12D），H727（G12V）、 用 KRAS 抑制剂（BI-2865，5 µM）或 DMSO 处理 CAPAN1 (G12V)、SW620 (G12V)、SW480 (G12V)、LOVO (G13D)、DLD1 (G13D) 和 HCT116 (G13D) 细胞 2 小时，且都进行生物重复后，作者使用 RNeasy Mini Kit（Qiagen 货号：74104）提取 RNA。详情大家可点击下面图片进入原文阅读。

 

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC10322706/

 

参与影响因子＞30分以上的杂志有：

杂志	引用次数	影响因子
Nature medicine	8	82.9
Nature	29	64.8
Cell	24	64.5
Science (New York, N.Y.)	1	56.9
Cancer cell	19	50.3
Nature methods	3	48
Journal of clinical oncology : official journal of the American Society of Clinical Oncology	1	45.3
Cell research	3	44.1
Circulation	4	37.8
Molecular cancer	2	37.3
Cell discovery	2	33.5
Immunity	7	32.4
Nature genetics	9	30.8
Nature immunology	4	30.5
Cell host & microbe	9	30.3

 

参与到文献中的应用有：

应用	现有文献数量
Gnen Expression	2650
Q-PCR	2466
RNA extraction	1406
RNA lsolation	580
PCR	443
Reverse PCR	372
RNA Seq	372
Quantitative Assay	356
DNA amplification	323
cDNA synthesis	250
Microarray	240
Sequencing	193
DNA synthesis	161
Cell Culture	148

PS：以上是部分应用举例。

 

参考文献：

【1】Exercise reduces inflammatory cell production and cardiovascular inflammation via instruction of hematopoietic progenitor cells

【2】Pan-KRAS inhibitor disables oncogenic signalling and tumour growth

 

RNeasy Mini Kit“自我介绍”

鄙人不才，虽只是小小的一个RNA提取试剂盒，也见了不少大世面，不仅如此，当你一层一层剥开我的面纱后，还会发现我的家族更加庞大，涉及样本范围甚广。

 

1）适用样本、用量及产量

可从少量到大量“细胞 / 组织 / 酵母（包括显微解剖组织和细针抽吸物等样本、毫克量的纤维组织：包括心脏和肌肉组织、以及小到单细胞的少量细胞：如 FACS 分选细胞）”中快速纯化出高质量的RNA，并且我还有一个庞大的RNeasy Kits 家族，请看以下我们的起始量及产量详情介绍

 

图1.RNeasy 程序的起始材料量

图2. 使用 RNeasy Kits 获得的总 RNA 产量

 

数量会因发育阶段、使用的生长条件等因素而变化

 

图3. 从单细胞中分离出可靠的 RNA。

 

图4. 产量重复性高，适用于敏感应用。

 

*5 位不同的使用者使用 RNeasy Micro 试剂盒从 2 毫克指定的大鼠组织中重复分离出总 RNA。在 ABI 序列检测系统上使用 QuantiTect Probe RT-PCR Kit 和 c-jun 特异性引物和探针进行定量实时 RT-PCR。

 

图5. 从细针抽吸物中获得高质量的总 RNA。

*使用 19.5 号活检针从兔肝脏中抽取细针，并立即将样本放入 RNAprotect Tissue Tube 中稳定。使用 RNeasy Micro 试剂盒分离总 RNA。用 Agilent 2100 生物分析仪扫描显示 RNA 质量很高。

 

图6. 对少至 100 个细胞的 RNA 进行 RT-PCR。

*用 RNeasy Mini Kit 从指定数量的 HeLa 细胞中分离出的总 RNA 的 RT-PCR。用不含 RNase 的 DNase 消解 10 µl （1/5）洗脱液，然后用 oligo-dT 引物进行反转录。2.5 微升（1/20）cDNA 混合液用于 50 微升 PCR。扩增出 452 bp 的 GAPDH 片段。C-：阴性对照；C+：阳性对照；M：100 bp 梯形图。

 

图7. 从各种样本中提取高质量 RNA。

*用 RNeasy Maxi 套件纯化的总 RNA 的甲醛琼脂糖凝胶和北印迹。每个泳道均含有从不同来源分离的总 RNA（10 µg）。所有组织均来自小鼠。酵母 酵母：酿酒酵母；大肠杆菌菌株：HB101。32P 标记的探针可识别 (G) GAPDH；(E) 翻译延伸因子 EF-1α；(O) 外膜蛋白 A 序列。(E 和 O 分别由瑞士巴塞尔大学的 P. Philippsen 和德国图宾根马克斯-普朗克生物研究所的 U. Henning 慷慨提供）。未检测枯草杆菌。M: 0.24-9.5 kb RNA ladder. 胚胎、Huh7 和 HeLa 细胞泳道中的 7.5 kb 带（指示）是核前体 RNA。

 

2）RNeasy 检测试剂盒比较