小优进修班∣in vivo jetPEI 使用常见注意事项

in vivo jetPEI作为体内核酸递送的工具，越来越被更多朋友们熟知。但是在使用过程中，不仅要考虑注射的体积，核酸和转染试剂的用量也至关重要，今天小编就整理了使用过程中的注意事项。

核酸用量以及注射体积、频率：
核酸递送用量主要取决于给药途径以及靶向器官。啮齿类动物中递送DNA、siRNA、oligonucleotides和shRNA的建议如表1。
最终注射液中核酸的浓度不超过0.5ug/ul
转染试剂的体积通过N/P比确定，标准流程中我们建议：N/P= 6-8 （每ug核酸建议0.12-0.16ul in vivo jetPEI），计算方法如下：

注射前，确保in vivo jetPEI和葡萄糖溶液在室温下平衡。
根据应用，可以进行多次注射。建议保持每周2-3次注射频率，同时保证每周每只动物最多注射3次。

表1. 大小鼠中常见注射途径的建议条件

转染复合物的配置：
对于DNA，建议使用高质量无内毒素的DNA， OD260/280 > 1.8。重悬于ddH2O中，储存液浓度3-7ug/ul
对于si/miRNA ,建议使用高质量等级的si/miRNA (PAGE 或者HPLC纯化），储存液浓度5-10ug/ul
建议使用试剂盒内提供的10%等渗葡萄糖溶液(w/v)进行核酸及转染试剂的稀释，有助于形成小且稳定的转染复合物。避免使用离子缓冲液例如PBS或者细胞培养基去进行转染复合物的配置。 
最终注射液中葡萄糖终浓度为5%，建议制备总混合溶液，确保形成均质的转染复合物，最小混合溶液体积50uL。

小鼠静脉注射的转染复合物配置参考

配置200ul 含5%葡萄糖的注射溶液，包含40ug质粒DNA和 N/P = 8的in vivo-jetPEI®
将40ug的DNA稀释在50uL的10%葡萄糖溶液中，轻涡旋。
将6.4ul的 in vivo-jetPEI®稀释在50uL的10%葡萄糖溶液中，加入无菌水至100ul，轻涡旋。
将稀释好的in vivo-jetPEI®立刻加入到稀释DNA中，短暂涡旋。
室温下孵育15min。
使用在室温下平衡的复合物对动物进行注射。
监测基因表达