我们深知每个项目背后的独特需求和挑战,因此致力于提供高品质定制化的科研服务,满足
您个性化的科研需求。
Absin可以提供全面的定制服务:
大分子定制: 多肽/蛋白/抗体定制;线性/环状mRNA定制
类器官技术: 类器官定制服务;类器官技术培训班;类器官平台搭建服务
免疫学服务: ELISA检测服务;多重荧光免疫组化服务
其他定制与服务:化合物/酶/抗体/蛋白标记服务;抗体/蛋白纯化服务;血清定制
定制案例一:用于WB、IP、IHC、FC、ELISA等实验的多抗制备
1、抗原设计
①客户提供正确的 NCBI 号或蛋白序列;②技术工程师进行抗原设计。
图1 抗原性质分析图
2、抗原制备
原核表达可溶蛋白/化学合成抗原多肽
3、抗体制备
①动物免疫:每个抗原免疫2只兔子;②抗体纯化:动物处死,取血;抗原亲和纯化抗体;③抗体验证:ELISA验证。
4、数据准备和发货
①数据:抗体制备流程及数据、抗体说明书、可溶蛋白SDS-PEAG/多肽合成的HPLC和MS报告;②发货:抗原亲和纯化抗体(大于5 mg);若客户需要可提供抗原蛋白0.5mg/目的多肽。
定制案例二:化合物/酶/抗体/蛋白标记服务
Absin可以提供多种常见荧光素标记服务,体系成熟,目前常规染料标记周期1-2周。需要注意的是标记会产生损耗,量越小的情况损耗越大,为尽量减少损耗,我们建议您至少100ug起标。
化合物标记流程:
我们会根据化合物的结构给出相应的标记建议:
定制案例三:蛋白表达及纯化服务
客户提供模板或全基因合成基因模板,经过跨膜区预测、抗原性质分析、可能的蛋白结构预测后给出蛋白表达建议:
图2 可能的蛋白结构预测
评估蛋白整体性质,若蛋白整体性质较好,则可以进行纯化流程:
1、扩增克隆到原核可溶表达载体中,测序。2、小试表达测试,SDS-PAGE。3、如有表达,进行大规模表达。4、蛋白纯化,SDS-PAGE。5、透析,SDS-PAGE,保存。
抗体定制常见问题解答
Q1:如何确定选择单抗还是多抗定制?
A1:单抗是一个B细胞克隆产生的针对一种抗原表位的的单一抗体;多抗是多个B细胞克隆产生的针对多种抗原表位的多种抗体混合物。对抗体特异性要求高,用量较大,需要长期使用一致的抗体,一般选择单抗(如WB/IP/IF/ICC等)。对抗体的特异性要求不高,需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做ELISA检测,一般选择多抗。
Q2:定制的抗体没有找到参考文献,有推荐的使用浓度吗?
A2:我们一般推荐先用1:1000做预实验,根据预实验结果,调整抗体使用浓度。另外,即使有参考文献,由于实验设备、操作体系等因素的影响可能会有所差异,建议老师结合自己的实验做下测试,以达到最佳的实验使用效果。
Q3:小鼠腹水得到的抗体和小鼠血清有交叉反应正常吗?纯化后是否可以解决这个问题?
A3:从小鼠腹水中得到的抗体肯定会对小鼠血清有亲和性,出现交叉反应属于正常现象。可以通过抗原亲和纯化得到特异性的抗体,能够较好改善交叉反应的现象。但由于纯化效率不可能达到100%,因此不能保证完全消除。