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直接特异性检测抗原特异性T细胞的试剂-MBL之MHC 四聚体

时间：2017-08-14 10:20:20 浏览次数：6884

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    MBL是日本第一家抗体制造商，作为一家领先的生物技术公司，为世界范围内的诊断和研究领域提供各种精细产品，MHC四聚体试剂即是其中之一。

下面，我们就来了解下MHC四聚体的相关知识吧。
 
MHC 四聚体原理
    MHC四聚体是利用MHC多肽复合物与抗原依赖性TCR特异性结合的原理，直接检测抗原特异性CTL的试剂。
    因为TCR的亲和力较低，跟MHC-多肽复合体解离速度较快，单体的MHC-多肽复合物不能用于检测抗原特异性T细胞。Altman等开发了MHC四聚体技术用于检测抗原特异性T细胞。MHC四聚体增强了与TCR的亲和力，使得使用流式细胞术就可以在体外准确地检测抗原特异性T细胞。
 
 
通过链霉亲和素将MHC/多肽复合物单体四聚体（Tetramer）化，可以使其与TCR保持在一个稳定的结合状态，成为可以利用的检测工具。
 
四聚体与五聚体的比较
五聚体包含2、3或5个荧光团，其卷曲螺旋结构域不稳定。
 

而四聚体的离解常数KD≈10-14mol/L，生物素和链霉亲和素的结合是已知的自然界最强的非共价相互作用之一。

所以，四聚体在研究中有明显的优势。

具体研究中，需要哪种四聚体，可以参考下面这张对应表。
 
抗体与四聚体对应表
 
     MBL的T-Select MHC四聚体主要使用PE、FITC、BV421或者APC标记，可以检测全血，外周血单核细胞（PBMCs），扩展细胞系等样品，可使用流式细胞仪、荧光显微镜等分析结果。
 
MBL 的MHC四聚体特点
 

    T细胞表面的CD8分子通过与 HLA Class I 分子结合增强了T细胞的抗原识别能力。因此，MBL开发了带有HLA α3结构域单点突变（Ala245Val）的T-Select HLA class I Tetramer，这有效地降低了CD8-HLA非特异性结合。这种突变的四聚体只有极低的CD8非特异性结合的同时保留了TCR特异性结合能力。
 
通过HLA突变降低了CD8非特异性结合，这极大地提高了HLA-多肽多聚体的特异性。
 
 
MBL MHC四聚体优势
   ● 最适的分子大小（最容易与TCR发生相互作用）；
   ● 结构稳定（链霉亲和素-生物素）；
   ● 完整的四聚体（有四个结合面）；
   ● CV值低（一个四聚体分子仅结合一个荧光色素）。
   ● MBL MHC四聚体是最可信的试剂，高品质、染色稳定、重复性好（批次间差异小）。
 
 

染色例
染色例1：HLA-A*02:01 CMV pp65 Tetramer

使用HLA-A*02:01 CMV pp65 Tetramer 试剂，将HLA-A*02:01 阳性CMV阳性患者外周血（左）和，HLA-A*02:01阴性外周血（右）进行染色。从实验结果可以看出，使用HLA class I heavy chain α3结构域中加入单点突变的T-Select MHC Tetramer试剂（下）和，没有加入单点突变的Tetramer试剂（上），表现的特异性有明显的差别。
 
T-Select HLA class I Tetramer通过在HLA class I heavy chain α3中加入突变降低了CD8非特异性结合，这极大地提高了HLA-多肽多聚体的特异性。
French Application Number； FR9911133
 
染色例2：HLA-A*24:02 EBV BRLF1 Tetramer
从HLA-A*24:02阳性健康人外周血中分离PBMC，利用MLPC法将诱导的EBV BRLF1 CTL line用HLA α3结构域加入单点突变的HLA-A*24:02 EBV BRLF1 Tetramer-PE (MBL code no. TS-M002-1)和HLA-A*24:02 Negative Tetramer-PE (MBL code no.TS-M007-1) HLA α3结构域中没有加入突变的HLA-A*24:02 EBV BRLF1 Tetramer-PE分别进行染色。
 
结果显示，用HLA α3结构域中没有加入变异的Tetramer，CD8阳性细胞中发现了非特异性染色。而用HLA α3结构域中加入变异的Tetramer则没有发现非特异性染色。
 
 
※本数据是用淋巴栅胞和7-AAD阴性栅分析得到。

MBL 四聚体产品
 
产品分类：
   ● MHC class I HLA-E Tetramer；
   ● WT1特异性的CTL的诱导和检测；
   ● Mouse MHC class II Tetramer；　　
   ● Human HLA class II Tetramer；　
   ● CD1d Tetramer.　　 
   ● MBL可定制四聚体产品
   ● 客户需提供MHC型、需要的allele和多肽序列信息。
 
’MBL其他热销产品
   ● 标签抗体、自噬抗体、外泌体提取试剂盒、外泌体保存buffer等。
 

 

 

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