【FACSCelesta实验应用系列】之0.1um微粒检测

 

本文摘自微信公众号：BD生物科学

【FACSCelesta实验应用系列】之0.1um微粒检测

 

【实验概述】

流式细胞仪对纳米级微粒的分辨能力是代表仪器的先进程度的指标之一，而近两年随着各种微囊泡、微颗粒的研究成为热点，流式细胞仪的这一检测能力也愈发成为科研工作者关注点之一，本实验即以第三方公司的纳米微粒为样本，探究FACSCelesta检测微粒的能力，为后续各微囊泡、微颗粒的检测打下基础！

 

【实验方法】

 

  ①/ 仪器配置

 

Flow cytometer	Laser	Filter
FACSCelesta	488nm Blue Laser	FSC / SSC(480/10)

 

  ②/ 试剂耗材

 

Products Name	Catalog No.	Size	Unit
SPHERO™Nano Fluorescent Particles (Spherotech)	NFPPS-0152-5	0.13um	5ml
SPHERO™ Flow Cytometry Nano Fluorescent Size    Standard Kit (Spherotech)	NFPPS-52-4K	0.22um 0.45um 0.88um 1.34um	4X5ml
BD FACSFlow™ Sheath Fluid	342003		20L

 

③/ 样本制备

 

      1)  Control：准备1根流式管，加入1ml Sheath用以确定本底噪音
      2)  单个微球对照管SingleControl ：准备5根流式管，分别加入1ml Sheath，各滴2滴小球，5管分别对应大小为0.13um/0.22um/0.45um/0.88um/1.34um的小球，摇均后直接上机
      3)  样本管：准备1根流式管，加入1ml sheath，依次加入以上5种大小的小球，混匀后直接上机

 

  ④/ 上机检测策略

 

      开启FACSCelesta，打开Diva软件，上样检测，收集100000events
       1)  Control 管上样，调节FSC/SSC电压，确定Noise位置
       2)  大小不同的单个微球对照管分别上样，在FSC/SSC图上将每种小球设门
       3)  样本上样，收集100000 events的数据

 

【实验结果】

 

 

 { Sample:0.13um/0.22um/0.45um/0.88um/1.34um Mix }

 

由结果可见，FACSCelesta的散射光通道FSC/SSC不仅可清楚地的将0.13um的纳米颗粒与本底噪音区分开，而且还可清晰地0.13um/0.22um/0.45um/0.88um/1.34um这５种大小不一的纳米颗粒完全区分，而这只需要配备常规的488nm蓝激光即可实现，无需其他任何特殊激光和通道。

* 本资料仅限科研用途使用

 

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