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流式检测人单核细胞亚群

时间:2018-04-28 03:25:50
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一、材料与试剂
1.  抗体
(1)鼠抗人CD56FITC(BD,562794)
(2)鼠抗人CD2FITC(BD ,555326)
(3)鼠抗人CD19FITC(BD,555412)
(4)鼠抗人CD14PerCP(BD,340585)
(5)鼠抗人CD16PacBlue(BD,558122)
(5)鼠抗人CD16PacBlue(BD,558122)
(6)鼠抗人HLA-DRAPC-Cy7(BD,335796)
2.  其他材料
(1)带K3EDTA的玻璃全血管(BDVacutainer366450)
(2)10×BDFACS裂解液(BDPharmigen,555899)
(3)20%甲醛
(4)PBS
(5)5 mL 聚丙烯管(BDFalcon,352063)
 
二、仪器
1.  BDLSRII流式细胞仪
 
三、步骤
1.  将人血加入到带K3EDTA的玻璃全血管,然后轻摇几次混合血液。
2.  将100 ul 全血加入到5 mL 的聚丙烯管,并贴上标签。
3.  取各种抗体5 uL 到血样中,轻拍管混合血样。
4.  室温,黑暗孵育样品。
5.  加入2 ml 1×BDFACS裂解液(10×Solution dilutedin ddH2O)
6.  混匀样品三次,离心2~3 min。
7.  室温,1 200 rpm 离心7 min。
8.  除去上清,用200 ul 2%甲醛重悬沉淀。
9.  BDLSRII流式细胞仪检测样品。
10.  使用FlowJo分析数据。(TreeStar,Inc)