BD流式细胞术临床应用研究-儿科

白血病是造血干细胞增殖分化异常而引起的恶性增殖性疾病。儿童白血病是小儿恶性肿瘤中最多见的一种，是5岁以上小儿死亡的主要原因之一。急性白血病每年发病率约占人口的5/10万，并有逐年增多的趋势。

恶性淋巴瘤是发生在淋巴组织的恶性肿瘤，主要分为霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤两大类。霍奇金病发生在小儿者约占8%-20%，非霍奇金氏淋巴瘤为10%，但在整个儿童期恶性肿瘤中，恶性淋巴瘤却很多见而居第三位。由于缺乏对本病的警惕，其早期症状和体征常不被重视或当作其他疾患来处理，误诊率可达60%以上。

流式细胞技术在儿童疾病方面的应用与成人类似，较常见的为造血系统肿瘤的免疫分型，感染性疾病检测，强直性脊柱炎的早期筛查，以及免疫功能的全面评估。

一、白血病免疫分型

免疫分型是国际公认的诊断造血系统肿瘤必不可少的重要标准之一。而流式细胞术（FCM）因具有快速、客观、多参数检测等优点，是目前被广泛认可的进行免疫分型的通用方法。

建立在流式细胞术（FCM）基础上的免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，定性或定量的测定细胞膜、浆及核的抗原表达情况，从而了解被测肿瘤细胞所属细胞系列及其分化程度，为造血系统肿瘤的诊断提供重要依据。

正确的试剂组合设计是流式细胞术免疫分型中至关重要的环节，对造血及淋巴系统肿瘤的诊断非常重要。BD公司在借鉴了许多国内外知名血液流式专家经验的基础上，针对流式血液诊断中常见的急性白血病（Acute leukemia，AL），以最常见的四色流式方法为基础，提供出以下检测方案（一步法和两步法）:

急性白血病
FITC	PF	PerCP	APC
cMPO	Ccd79a或CD22	CD45	CCD3
CD7	CD117	CD45	CD5
CD14	CD64	CD45	CD33
HLA-DR	CD56	CD45	CD34
CD2	CD13	CD45	CD11b
CD10	CD19	CD45	CD20
IgG1	IgG1	CD45	IgG1
CD4	CD8	CD45	CD3

非霍奇金淋巴瘤
FITC	PF	PerCP	APC
CD4	CD8	CD45	CD3
CD7	CD5	CD45	CD2
Kappa	Lambda	CD45	CD20
CD20	CD22	CD45	CD5
CD10	CD25	CD45	CD19
CD56	CD38	CD45	CD19
cKappa	cLambda	CD45/19	CD38

二、微小残留（MRD）检测

白血病微小残留（Minimal Residual Disease，MRD）是指患者经过诱导缓解治疗，并按目前所确定的疗效标准取得完全缓解（CR）后体内残留的微量白血病细胞。随着化疗、特异靶向治疗、造血干细胞移植技术的不断提高，白血病的治疗效果日益改善，然而复发仍是困扰白血病治愈的一个难点。白细胞微小残留病是复发的主要根源。

用流式细胞技术检测MRD的临床意义如下：

1）早期判断患者复发的可能性；

2）预测急性白血病复发的可能性；

3）疗效判断，是评定富集后用于自体造血干细胞移植骨髓或外周血及“清洗”程序的效果的有效工具；

4）研究白血病发生发展的特征，例如证明白血病进程中中央神经系统的参与。

免疫分型方案推荐：

B-ALL MRD 方案推荐
FITC	PF	PerCP	APC
CD34	CD10	CD45	CD19
CD20	CD22	CD45	CD19
CD10	TdT	CD34	CD19
CD20	CD10	CD34	CD19
CD10	CD13	CD34	CD19
CD10	CD33	CD34	CD19

三、感染性疾病检测

CD64是能识别免疫球蛋白、对IgG单体具有高亲和力、介导体液免疫和细胞免疫、对感染性疾病具有早期诊断价值的IgG Fc片段1（FcγR1）。正常情况下，CD64主要表达于巨噬细胞、单核细胞及树突状细胞表面，中性粒细胞表面几乎不表达CD64。当机体患感染性疾病时，中性粒细胞表面CD64表达迅速升高。

CD64作为感染性疾病良好的诊断标准，在临床上具有广泛的应用前景，对于多种呼吸系统感染性疾病的早期诊断具有重要意义。

检测目的：感染性皮肤病的早期诊断

检测指标：CD64

临床意义：1）高敏感、高特异的诊断感染性疾病的早期标志物； 2）区分感染性炎症和活动性自身免疫性疾病；

3）监测抗菌药物疗效并预测术后感染 4）鉴别细菌感染性疾病和病毒感染性疾病

应用举例：推荐产品及货号

CAT NO.	DESCRIPTION	SIZE
340768	BD Quantibrite TM CD64 PE/CD45 PerCP	50 Tests
341124	BD Oncomar TM CD14 FITC/CD64 PE	50 Tests

四、免疫功能评价（淋巴细胞亚群检测）

淋巴细胞是机体细胞免疫和体液免疫应答功能的重要细胞成分。利用流式细胞术分析淋巴细胞亚群水平，可以帮助评价机体免疫状态，是目前广泛应用于临床各领域的重要检查指标。

机体正常情况下，各种淋巴细胞亚群（T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞）保持一定的数量和比例，相互作用，稳定调节，维持着机体正常的免疫功能。当不同的淋巴细胞亚群的量及功能发生异常改变时，机体就会产生一系列的病理变化及免疫功能失调，导致疾病的发生。测定人类淋巴细胞亚群的变化，对早期发现和控制疾病，指导临床治疗，评估机体免疫状态都有着非常重要意义。

在临床上，外周血淋巴亚群分析已广泛用于许多疾病的辅助诊断，如HIV感染、抑制免疫检测、原发或获得性免疫缺陷病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤、造血系统疾病、变态反应性疾病、呼吸及消化系统疾病等，对于分析发病机制，观察治疗疗效及监测预后有着重要的临床意义。

检测目的：疾病治疗后评估，检测病程，辅助治疗，疾病预防

检测指标：1）T细胞亚群

总T细胞：CD3+ 辅助性T细胞：CD4+

细胞毒性T细胞：CD8+ 免疫调节性T细胞（Treg）：CD4+CD25HiCD127Low

免疫抑制性T细胞：CD3+CD4-CD8- 自然杀伤性T细胞（NKT）:CD3+CD56+CD16+;CD3+CD56+CD4+;

CD3+CD56+CD8+

Th1和Th2细胞：IL-2，TNF-α,IFN-γ

2)自然杀伤性细胞（NK）:CD56+CD16+

3)B细胞亚群：CD19+,CD20+

临床意义：1）鉴别诊断急性病毒感染与慢性病毒感染，并判断抗病毒药物的治疗效果

2）预防术后感染

3）机体免疫功能评估，判断预后

推荐产品及货号

CAT NO.	DESCRIPTION	SIZE
340491	BD MultitestTM CD3/CD8/CD45/CD4 with Trucount Tubes	50 Tests
348047/337181	CD28 PE/PerCP-Cy TM 5.5	100 Tests/50 Tests
340031	BD Simultest TM CD-8/CD28	50 Tests
347943	CD44 FITC	100 Tests
341134	BD Oncomark TM CD4/CD25/CD3	50 Tests
347643/335789	CD25 FITC/PE-CyTM 7	100 Tests
341132	BD Oncomark TM CD38/CD56/CD19	50 Tests
340456	BD Fastalmmune TM IFN-γ/IL-4	50 Tests

五、强直性脊柱炎早期筛查（HLA-B27检测）

HLA-B27是在有核细胞上表达的I型MHC分子，在淋巴细胞的表面尤为丰富。根据流行病学统计结果显示，HLA-B27阳性的人患多种免疫疾病的几率，比一般人要高很多。

目前临床上发现与HLA-B27高度相关的疾病主要有：

1）强直性脊椎炎，HLA-B27阳性率为90%，其表达与强直性脊椎炎有高度相关性；

2）Reiter’s综合征，HLA-B27阳性率为70-90%；

3）银屑病性关节炎，HLA-B27阳性率为50-60%；

4）葡萄膜炎（眼色素层炎），HLA-B27阳性率为40-50%；

5）溃疡性结肠炎伴有关节病，HLA-B27阳性率为5-10%。

检测目的：辅助疾病确诊，鉴别诊断，高危人群预测

检测指标：外周血中T淋巴细胞HLA-B27表达水平

临床意义：1）辅助疾病确诊，对于早期发病较为隐匿、症状多变、极易被误诊漏诊的疾病，这意味着早期治疗；

2）鉴别诊断症状相似的疾病； 3）对高危人群进行预测

应用举例：推荐产品及货号

CAT NO.	DESCRIPTION	SIZE
340183	BDTM HLA-B27 Kit	50 Tests