BD流式细胞术临床应用研究-妇产科

女性生殖系统的疾病即为妇科疾病，包括外阴疾病、阴道疾病、子宫疾病、输卵管疾病、卵巢疾病等，给女性的正常生活和工作带来了极大的不便。

一、复发性流产

复发性流产（recurrent spontaneous abortion, RSA）是指连续发生两次或两次以上的流产，病因复杂，约有50%病因不明。经过近20年的发展，逐渐明确所谓原因不明自然流产80%以上都与免疫因素相关。免疫因素即为免疫功能异常。免疫功能异常包括自身免疫和同种免疫。妊娠是成功的半同种移植过程，孕妇由于自身免疫系统产生一系列适应性变化，从而对宫内胚胎移植物表现出免疫耐受，而不发生排斥反应。如果免疫调节和抑制细胞失衡，如滋养细胞膜HLA-G表达异常，NK细胞亚群平衡失调，Thl/Th2平衡失调，保护性抗体和（或）封闭抗体异常，巨噬细胞分泌的细胞因子异常，母体对胚胎父系抗原识别异常而产生免疫低反应性，导致母体封闭抗体或保护性抗体缺乏、免疫排斥反应，流产发生。

从1988年Gendron首次报道开始，NK细胞数量和功能等状况的异常一直被认为是导致RSA的重要因素。

检测目的：肿瘤早期诊断，患者辅助诊断，判断预后

检测指标：CD4，CD8，封闭抗体，CD3，lgG，CD3，CD16，CD56，Th1，Th2

临床意义：1）预防流产，通过Treg(调节性T细胞)来调整Th1、Th2水平可以作为未来治疗和预防流产的新型科学技术；

2）辅助治疗，用流式细胞技术进行交叉配型（FCXM，即检测母体中抗父体白细胞抗体）。

应用举例：推荐产品及货号

CAT NO.	DESCRIPTION	SIZE
340182	BD Fastlmmune TM IMK-Lymphocyte Kit	50 Tests
347344	CD3-PerCP	100 Tests
340133	CD4-FITC	100 Tests
340939	CD25-APC	100 Tests
51028	BD Fastlmmune TM CD127-CE	25 μg
340456	BD Fastlmmune TM IFN-γ/IL4	50 Tests
341652	CD69-PE	50 Tests
340584	CD8-APC	100 Tests

二、妇科肿瘤

据2012年中国卫生统计年鉴统计，中国死亡率排名前十位的恶性肿瘤是肺癌，肝癌，胃癌，食管癌，结直肠癌，白血病，脑癌，乳腺癌，胰腺癌和骨癌。

乳腺癌是全世界妇女最常见的癌症，占所有妇女癌症的16%。中国的乳腺癌发病率近年来明显上升，每年新增达3%-4%，超过世界水平1%-2%，为女性易患肿瘤第一位。同时，中国主要城市10年来乳腺癌发病率增长了37%，死亡率增长了38.9%。除了乳腺癌之外，卵巢癌的发病年龄是妇科肿瘤中最宽的，患病初期很少有症状，以至确诊时60%-70%的卵巢恶性肿瘤已属晚期。近20年来卵巢癌的五年生存率仍徘徊在较低水平（20%-30%）。中国卵巢癌发病率为3.2/10万。

检测目的：肿瘤早期诊断，患者辅助诊断，判断预后

检测指标:1)T细胞亚群

总T细胞：CD3+

辅助性T细胞：CD4+

细胞毒性T细胞：CD8+

免疫调节性T细胞（Treg）：CD4+CD25HiCD127Low

免疫抑制性T细胞：CD3+CD4-CD8-

自然杀伤性T细胞（NKT）:CD3+CD56+CD16+；CD3+CD56+CD4+；CD3+CD56+CD8+

Th1和Th2细胞：IL-2，TNF-α，IFN-γ

2）自然杀伤性细胞（NK）：IL-2，TNF-α，IFN-γ

3）B细胞亚群:CD19+,CD20+

临床意义：1）对正常人群进行筛查进行肿瘤早期诊断，可作为患者的辅助诊断；

2）监测疾病进程并判断疾病预后；

3）对肿瘤浸润淋巴细胞进行计数，预测癌症患者的生存期、治疗反应以及复发状况；

4）帮助临床选择最佳治疗方案，作为个性化癌症诊断及治疗的强有力工具。

推荐产品及货号

CAT NO.	DESCRIPTION	SIZE
340503	IMK Kit Fastlmmune TM	50 Tests
340182	IMK-Lymphocyte Kit	50 Tests
340383 /340344/340300	BD Tritest TM	50 Tests
340499	BD Multitest TM CD3/CD8/CD45/CD4	50 Tests
340046/335822	CD8 PE/PE-Cy TM 7	100 Tests
340133/341115	CD4-FITC/APC-Cy TM 7	100 Tests
349201 /340542	CD3-FITC	50 Tests
340167	BD FACSCount TM Reagent Kit	50 Tests
340456	BD Fastlmmune TM IFN-γ/IL4	50 Tests

三、细胞因子检测

Th细胞（CD4+T细胞亚群）根据自身所分泌的细胞因子，分为Th1和Th2两个亚群。Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-γ和TNF-β等细胞因子，主要介导细胞免疫反应，在诱发器官特异性自身免疫病，器官移植排斥反应和抗感染免疫中起着重要的免疫调节作用。Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13，主要调节体液免疫反应，在诱发过敏反应中起着关键的作用。Th1/Th2亚群及其相互之间的平衡在免疫应答的调节中起着关键的作用，因此Th1/Th2平衡的失调与多种疾病的发生、发展和预后有着密切的关系，是很多疾病发生的根源和恶化的动力。流式细胞技术检测细胞因子，多用于风湿免疫科（类风湿性关节炎）、呼吸科（过敏性哮喘）、皮肤科（过敏性皮炎）、感染科（胞内外感染）、肿瘤科、器官移植（急排/耐受）。

在妇科疾病中，Th1型细胞因子和Th型细胞因子的平衡对维持正常妊娠、避免出现病理性症状有重要作用。Th1型细胞因子分泌过多对着床、滋养细胞生长、胚胎发育和胎儿生存都是不利的，而Th2型细胞因子在妊娠中起免疫营养作用，保证妊娠成功。

检测目的：检测免疫状态，观察疾病进程，判断预后，辅助诊断

检测指标：IL4/IFN-γ，IL-2，TNF-α

临床意义：1）辅助疾病治疗，通过调节细胞因子的平衡状态来调节免疫应答；

2）检测疾病治疗和预后，通过对病情的实时监测，给临床治疗提供参考。

应用举例：推荐产品及货号

CAT NO.	DESCRIPTION	SIZE
347344	CD3-PerCP	100Tests
340584	CD8-APC	100 Tests
340456	BD Fastlmmune TM IFN-γ/IL-4	50 Tests
341652	CD69-PE	50 Tests

四、产前诊断

1）新生儿溶血症的检测

孕妇血循环中胎儿红细胞的绝对数量及胎儿红细胞与母体细胞的比例都可以表示胎母出血的程度，从而预测新生儿溶血症的发生。该技术主要是通过检测胎儿的血红蛋白或红细胞血型抗原，由此分析母子出血程度，检测进入母体血液循环中胎儿红细胞数量。

应用流式细胞术是新近应用在检测胎儿血型的一种新型方法：妊娠期发生胎母出血反应的孕妇的外周血中含有微量的胎儿红细胞，标记PE荧光素的抗-i可识别胎儿红细胞并与之结合；IgG类抗—A、B、D可与红细胞上相应的抗原结合，致敏红细胞。标记荧光素FITC的抗人IgC（Fab’）2可连接抗-A、B、D，这样便可通过流式细胞技术来分析细胞的荧光染色情况。

应用流式细胞术产前非侵入性检测胎儿血型，可以在孕中期便准确测知胎儿血型，便于医生及早进行计划预防与治疗。非侵入性检测对母亲及胎儿均安全，而不似常规检查采集羊水及绒毛膜那样有危险，并可避免采羊水穿刺过程中所引起的胎-母出血现象。这项技术的研究对于ABO和Rh新生儿溶血病的及早诊断和预防具有重要意义。

2）胎儿细胞的富集

FACS自1990年由Bianchi首次成功应用于胎儿NRBC的分选，随着单克隆抗体的广泛使用，新的荧光物质的不断发现，流式细胞技术已成为分离胎儿细胞的主要工具。FACS法的优点是富集的纯度较高，此法可将胎儿细胞富集1000倍。

目前分离胎儿细胞所用的抗原标记可分为2类：一是阳性选择，即利用抗胎儿NRBC表面或胞内特异性抗原的单抗，如CD71、GPA、球蛋白、CDF36等；另一种是阴性选择，即利用抗母体白蛋白特异抗原的单抗，如CD45。CD71即转铁蛋白受体，是一种胎儿红细胞膜抗原，在胎儿NRBC上高度表达，它随孕周而增高，并随着胎儿红细胞的成熟，这种抗原消失，最适宜分离胎儿细胞之用。

用流式细胞技术富集到的胎儿细胞，后续可用来培养及分析，是产前诊断的重要基础。