HTRF助力高效GPCR靶向药物发现

小时候上学，最渴望就是放寒假，最可怕的是竟然还有寒假作业！

长大之后，假期来了！！

开心开心！我要放飞自我~

可是我的寒假作业呢？.......

放假前，老板留下了一道思考题，我们新年项目方向：针对GPCR靶点做药物研发

小优小优，有你无忧！小优技术贴，带你入门GPCR靶点药物研究

什么是GPCR？

G蛋白偶联受体（GPCR）是一个庞大且功能多样的膜蛋白家族，参与到大多数的细胞和生理过程的调节，包括视觉、嗅觉、代谢、免疫反应、神经活动等等，并与肥胖、糖尿病、心血管疾病、炎症、肿瘤、老年痴呆症等严重影响人类健康的疾病有关，市场上40%的处方药其靶点是GPCR，因而是现代药物研发中应用最多的靶点。

HTRF技术----高通量药物筛选研发领军技术！

HTRF®（均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是一种用来检测纯液相体系中待测物的技术。该技术基于荧光共振能量转移（FRET）和时间分辨荧光（TRF）两大技术，开通的高通量药物筛选利器。适用于药物早期发现和功能性检测，由于实验通量高、操作简单方便、数据真实可靠、高性价比，深受国内各大药企喜爱！

HTRF在GPCR研究中的应用优势：

1.操作简单，空板直接加样，加完即可检测，时间短！                                       2.适合珍贵样本：整个实验体系只需20ul

3.均相检测：无需包被，免洗ELISA，省时省力！                                              4.体系稳定：7天内可随时检测，信号基本不变

5.数据客观真实：比值处理可有效去除背景荧光，假阳性率和价阴性率低          6.高端检测，只需简单的酶标仪就可以轻松搞定！

应用举例一：HTRF在GPCR功能性研究应用

1.1.GPCR 第二信使cAMP检测

cAMP作为第二信使在信号转导方面发挥着至关重要的作用。

HTRF有三款检测cAMP试剂盒：

三种试剂盒均采用了HTRF ® 技术，竞争法检测原理，每种试剂盒都针对特定范围的cAMP浓度，从而确保了实验的灵敏度。所有试剂盒均可用于96孔、384孔或者1536孔的细胞水平的实验。

产品信息：

1.2. GPCR第二信使IP1检测——可替代钙流

Gq通路活性的检测有两种途径，分别测定细胞内Ca2+浓度的变化和IP3含量的变化，前者主要通过荧光法来实现。后者中的IP3半衰期很短，可通过测定IP1的含量，可以知道细胞内IP3的产量，从而研究Gq通路的活化过程。Cisbio基于HTRF ® 技术的IP1测量试剂盒是研究Gq通路的良好工具。目前该试剂盒被广泛应用于药物的高通量筛选。

产品信息如下：

1.3 HTRF技术在磷酸化蛋白检测中的应用

实验时，将细胞处理完毕，然后裂解细胞，将裂解液转移到新的微孔板中，加入二种抗体混合，室温孵育2小时即可进行检测！

产品信息如下：

应用举例二：HTRF在 GPCR的配体受体结合及药物筛选应用 – Tag-lite技术

Tag-lite技术是SANP-Tag与HTRF技术结合，进行活细胞表面受体分析的一种技术。

首先构建SNAP与目标GPCR的共转染质粒，然后转染细胞，得到共表达SNAP和目标GPCR的细胞，使SNAP标记上能量供体Tb，生成标记Tb的GPCR细胞株，即口进行受体配体结合实验,当加入能量受体d2标记的配体是，受体和配体结合，Tb和d2接近，产生HTRF信号！如下图：

Tag-Lite®技术优势

● 无放射性

● 基于活细胞的GPCR受体配体结合分析的平台，构建的细胞可用于所有功能性检测

● 采用HTRF®技术，背景低、操作简单、 数据质量高

想要HTRF更多资料和产品技术介绍，可联系电话：13501872804；邮箱：chengzq@univ-bio.com