流式技术资源中心

CAR-T细胞全面解决方案

时间：2019-05-25 02:24:27 浏览次数：3044

扫一扫

CAR-T（Chimeric Antigen Receptor T-Cell immune therapy）全称嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，原理是将病人体内取得的T细胞，用基因工程方法经激活、转染、修饰、扩增后，重新注射到病人体内，通过激发人体自身的免疫系统来消灭肿瘤。

| CAR-T制备过程 |

| T细胞分选 |

将外周血处理成PBMC —— 磁珠标记T细胞 —— 上柱分选 —— 洗脱目的细胞

用途	货号	产品名称	规格
科研级别磁珠	130-050-101	CD3 MicroBeads, human	2mL
	130-045-101	CD4 MicroBeads, human	2mL
	130-045-201	CD8 MicroBeads, human	2mL
GMP级别磁珠	130-017-601	CliniMACS CD3 MicroBeads	7.5mL
	130-030-401	CliniMACS CD4 MicroBeads	7.5mL
	130-030-801	CliniMACS CD8 MicroBeads	7.5mL

| T细胞活化、扩增 |

T细胞活化第一信号：TCR-CD3 识别MHC抗原复合物，从而激活下游的信号通路。
T细胞活化第二信号：第一信号不足以激活T细胞，APC表面共刺激分子（如B7）和T细胞表面相应受体（如CD28）结合，向T细胞提供第二活化信号。

用途	货号	产品名称	规格
方法一：可溶CD3、CD28抗体； $说明: C:\Users\ADMINI~1\AppData\Local\Temp\1558576351(1).png$ 单独使用可溶CD3、CD28抗体刺激T细胞，需要提前包板子	170-076-124	MACS GMP CD3 pure 0.2mg	0.2 mg in 1 mL
	170-076-117	MACS GMP CD28 Pure	0.5 mg in 1 mL
	170-076-116	MACS GMP CD3 Pure	1 mg in 1 mL
	130-093-387	CD3 pure functional grade, human	100 μg in 1 mL
	130-093-375	CD28 pure functional grade, human	100 μg in 1 mL
方案二：微米级别磁珠刺激单独使用CD3、CD28可溶性抗体刺激T细胞	130-091-441	T Cell Activation/Expansion kit, human	Kit
方案二：微米级别磁珠刺激单独使用CD3、CD28可溶性抗体刺激T细胞	130-093-627	T Cell Activation/Expansion Kit, mouse	Kit
方案三：纳米级别磁珠刺激 nm级别的磁珠上包被了CD3&CD28抗体，高效刺激T细胞活化	130-111-160	T Cell TransAct	Kit
	170-076-156	MACS GMP T Cell TransAct	Kit
	130-109-104	TransAct T Cell Reagent-Large Scate，human	Kit

| CAR-T产品质控 |

1、细胞活力

在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比即细胞活力。死细胞自发荧光很高，会造成假阳性，使实验充满未知数。

左图：只研究活细胞，阳性细胞比例为61%；右图：没有区分细胞死活，阳性细胞比例为40%，区分细胞死活很明显的影响实验结果。

产品编号	名称	规格
562247	BD Horizon™ Fixable Viability Stain 450	0.1 mg
564406	BD Horizon™ Fixable Viability Stain 510	100 µg
564407	BD Horizon™ Fixable Viability Stain 520	150 µg
564995	BD Horizon™ Fixable Viability Stain 570	150 µg
564996	BD Horizon™ Fixable Viability Stain 620	100 µg
564405	BD Horizon™ Fixable Viability Stain 660	100 µg
564997	BD Horizon™ Fixable Viability Stain 700	100 µg
565388	BD Horizon™ Fixable Viability Stain 780	200 µg
564907	BD Pharmingen™ DAPI Solution	1 mg
559925	BD Pharmingen™ 7-AAD	2 mL
556463	BD Pharmingen™ Propidium Iodide Staining Solution	2 mL

2、细胞凋亡检测之细胞凋亡之PS外翻的检测

Annexin V是一种Ca²⁺依赖的磷脂结合蛋白，对PS有高度的亲和性。可在Annexin V上偶联荧光素检测凋亡早期发生的PS外翻。由于死亡的细胞膜通透性增加，可用膜不通透性核酸染料结合DNA，区分死细胞。

产品编号	名称	规格
556547	BD Pharmingen™ FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I	-
559763	BD Pharmingen™ PE Annexin V Apoptosis Detection Kit I	-
550911	BD Pharmingen™ Annexin V-FITC Fluorescence Microscopy Kit	25 Slides
550474	BD Pharmingen™ APC Annexin V	100 Tests
556420	BD Pharmingen™ FITC Annexin V	100 Tests
556454	BD Pharmingen™ Annexin V Binding Buffer, 10X concentrate	50 mL
556463	BD Pharmingen™ Propidium Iodide Staining Solution	2 mL
559925	BD Pharmingen™ 7-AAD	2 mL
561527	BD™ Accutase™ Cell Detachment Solution	100 mL

3、细胞增殖能力

处于周期的细胞核（G1，S，G2，M细胞周期阶段）中表达的Ki-67抗原。在G0期不表达，无法检测到。在细胞周期的间期期间，它与核仁成分相关，并且它在M期的染色体表面。

产品编号	名称	规格
559619	BD Pharmingen™ FITC BrdU Flow Kit	50 Tests
552598	BD Pharmingen™ APC BrdU Flow Kit	50 Tests
562158	BD Horizon™ Violet Proliferation Dye 450	1 mg
565082	BD Horizon™ CFSE	1 mg

4、T细胞表型分型检测

5、CRS细胞因子风暴检测

CAR-T治疗骨髓源肿瘤最显著的毒性是CRS。高度增殖的T细胞能引起CRS，表现为高热和肌痛，不稳定的低血压和呼吸衰竭。从CRS观察中发现一个关键的点，除了预期的效应细胞因子INF-γ外，IL-6在CART治疗的细胞指数级增殖期间也会迅速提升。CRS可能直接与另一个毒性相关联，即巨噬细胞活化综合征。