DC细胞全面解决方案

树突细胞根据其独特形态而得名,是一组分布广泛、由骨髓来源的、具有迁移能力的免疫细胞，是目前功能最强大的抗原递呈细胞（APC），也是唯一能活化静息型T细胞（Naïve T cells）的APC,引起T细胞初级免疫应答。

一、

树突状细胞分化发育、功能

1、DC树突状细胞的分化发育Overview

2、Pathways of human dendritic cell (DC) development

3、Regulation of DC development and homeostasis in mice

4、DC controllers of adaptive immunity DC与获得性免疫之间的关系

二、

树突细胞分群

1、Phenotype of human DC subsets

2、Phenotype of mouse lymphoid and nonlymphoid tissue DC

三、

树突细胞workflow

1、如何获取DC细胞？

（1）使用CD34、CD133磁珠分选得到高纯度造血干细胞，体外培养，诱导成DC细胞；

（2）磁珠分选单核细胞（CD14+）诱导成DC细胞；

（3）使用BDCA1、4、3直接分选DC细胞 ( BDCA-1(CD1c) DC Iso kit; CD304( BDCA-2) MicroBeads, kit; CD141(BDCA-3) MicroBeads, kit)；

所需产品：

用途	产品编号	名称	规格
分选PDC用磁珠	130-090-509	CD303 (BDCA-2) MicroBead Kit, human	Kit
分选PDC用磁珠	130-097-240	Diamond Plasmacytoid Dendritic Cell Isolation Kit II, human	Kit
分选MDC1用磁珠	130-119-475	CD1c (BDCA-1)+ Dendritic Cell Isolation Kit, human	Kit
分选MDC2用磁珠	130-090-512	CD141 (BDCA-3) MicroBead Kit, human	Kit
分选单核细胞磁珠	130-050-201	CD14 MicroBeads, human	2mL
分选造血干细胞磁珠	130-100-453	CD34 MicroBead Kit UltraPure, human	2mL
分选造血干细胞磁珠	130-094-913	Diamond CD133 Isolation Kit, human	2mL
Mo-DC诱导用细胞因子	130-093-919	Human IL-4, premium grade	5μg
	130-093-864	Human GM-CSF, premium grade	10μg
	130-093-897	Human IL-1β, premium grade	10μg
	130-094-015	Human TNF-α, research grade	10μg
	130-095-365	Human IL-6, research grade	10μg
	130-096-481	Human IFN-γ1b, premium grade	10μg

2、Mo-DC Workflow

Day 0 分离出的单核细胞(3×10⁸ cells)用3 mL的完全培养基（RPMI 1640, 2 mM L-glutamine, 1% autologous plasma），添加250 IU/mL IL-4 、800 IU/mL GM-CSF进行培养。

Day 2 从培养体系吸出1.5 mL，离心。用1.5 mL完全培养基加2倍浓度的IL-4和 GM-CSF，再添加到原培养体系中

Day 6 从培养体系吸出1.5 mL，离心。用1.5 mL培养基（添加2000 IU/mL IL-6, 400 IU/mL IL-1β, 2000 IU/mL TNF-α, 2 µg/mL PGE₂），再添加到原培养体系中，培养24小时。

Day 7 通过流式检测成熟Mo-DCs (mMo-DCs)的活性为95.4±2.4%，得率为23%。

3、MLR混合淋巴细胞反应

4、DC细胞亚群分析

Panel一：人DC细胞亚群鉴定：

4-Color Assay；

R3: lin-HLA-DR-CD123+嗜碱性粒细胞；

R4：lin-HLA-DR+CD123+淋巴系细胞DC（DC2）；

R5：lin-HLA-DR+CD11C+髓系DC（DC1）

Panel二：小鼠DC细胞亚群鉴定：

reference ：

1：Alexander M. Steffen J（2014）Development and Function of Dendritic Cell Subsets.Immunity Review

2: Barbara U. Caetano R.（2015）Defining dendritic cells Current Opinion in Immunology 2015, 32:13–20

3：Miriam M. Priyanka S. Julie H. Jennifer M. and Arthur M.（2013）The Dendritic Cell Lineage: Ontogeny and Function of Dendritic Cells and Their Subsets in the Steady State and the Inflamed Setting Annu Rev Immunol. 2013 ; 31

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