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T细胞研究

时间:2019-05-25 03:59:10 浏览次数:4093

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T细胞磁珠分选产品


 


免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合,在外加磁场中通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,而无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,进而使细胞得以分离。


BD IMag 磁珠分离系统步骤:

美天旎磁珠基本分选步骤


 

 

 

步骤一:使用磁珠偶联的抗体去标记细胞;
步骤二:把标记好的细胞过分选柱(分选柱周围会有磁铁);
步骤三:带磁珠的细胞就留在柱子上,不带磁珠的细胞就流走了,从而实验分选,需要搭配分选器。

 


无柱分选 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 


有柱分选 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 

分选器(套装):

 

分选柱:

分选buffer

T细胞常见分选产品:

 

T细胞亚型概要


根据功能,T细胞可以分为三群:细胞毒性T细胞、辅助性T细胞(Th)和调节T细胞(Tregs)。不同细胞表达的抗原标记物和分泌的细胞因子的差异,为研究T细胞多样化的性质和功能提供了有价值的线索。


例如,CD8+细胞毒性T细胞通过释放穿孔蛋白、颗粒酶、颗粒溶解素从而消灭被感染的靶细胞,而CD4+辅助T细胞(如Th1、Th2、Th9、Th17和Tfh细胞)几乎没有细胞毒性,他们通过分泌细胞因子作用于其他白细胞(如B细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞)从而清楚病原体。Tregs通过多种机制抑制T细胞的功能,包括与效应T细胞亚群结合从而阻止其分泌细胞因子。

 


常见T细胞Panel:


 

T细胞检测所需辅助试剂:


BD CBA和胞内流式细胞术都可对样本进行有效分析。胞内流式细胞术的长处在于它能够从一异质性样本中确定表达某种细胞因子的细胞的数量和表型,而BD CBA的优势在于它能同时定量分析多种细胞因子。BD CBA检测的是细胞分泌到周围即止中的细胞因子,因此这些细胞还可用于其他实验,所以这两种技术得以互补。


CBA优点:


样本量少
灵敏度高
实验步骤简便 弹性设计实验 结果分析容易
每次检测仅需25-50μl样本;灵敏度可达0.274pg/ml 时间快速,仅需3-4小时,快速上样 最多可同时测定30种蛋白,实验可重复性高 利用FCAP Array软件,不论样本数目多少,可快速分析完成分析

 

 

T细胞信号分析的工具: Phosflow


T细胞由大量信号转导分子的复杂信号通路所激活和调节,包括抗原和细胞因子的受体、激酶和转录因子。当外源抗原进入机体时,它们被内源免疫系统识别,引起免疫细胞表面表达共刺激分子并分泌细胞因子。

这些表达的分子通知适应性免疫入侵病原菌的类型和强度。然而,内源性CD4+T细胞分化成Th1、Th2、Th9、Th17、Tfh或Treg细胞。

T细胞分化受蛋白磷酸化调节。不同的细胞因子与由内源T细胞表达的同源受体相结合,可以导致激活蛋白(包括信号转换器和转录(Stat)蛋白激活剂)的磷酸化和二聚化。经过磷酸化和二聚化,激活的Stat蛋白进入细胞核内,结合在很多不同基因启动子上,导致其他转录因子和特定T细胞亚型的相应细胞因子的表达。

BD Phosflow技术:
同时分析多种胞内磷酸化蛋白和细胞表面标记分子,进而得到各个群体细胞中信号转导的多种信息。即对单个细胞的胞内信号转导事件进行详尽的研究,实验步骤如下:

 

T细胞研究工具总结:

 

 
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