全自动组织处理器处理小鼠脾脏

时间：2020-06-04 00:26:57

浏览次数：360

注意：gentleMACSTM Dissociators的使用细节可参考厂家说明书

注意：在本文所展示的结果中，每个gentleMACS C管解离一个脾脏

1. 将小鼠脾脏加入含有PEB缓冲液的gentleMACS C管中:

1-2个小鼠脾脏：3ml

3-4个小鼠脾脏：6ml

5-6个小鼠脾脏：9ml

2. 拧紧C管管盖，将其倒置于gentleMACS Dissociator上

注意：拧紧C管超过第一道阻力点

注意：确保样品材料位于转子/定子区域

3. 选择并运转以下程序之一：

1–2 mouse spleens: m_spleen_01

3–6 mouse spleens: m_spleen_04

4. 程序终止后，将C管从gentleMACS Dissociator 中取出

5.（可选）瞬时离心，收集管底样本

6. 重悬样本，将细胞悬液通过MACS SmartStrainer（70μM）过滤至15ml离心管中（1-2个小鼠脾脏/C管）或50ml离心管中（3-6个小鼠脾脏/C管）

注意：MACS SmartStrainer使用之前先用2ml缓冲液过滤一次

注意：C管管盖中心有隔膜密封的小口，可通过这个小口将解离的组织从C管中移取出来（使用1000μl的移液枪）

7. 用5ml缓冲液清洗滤器

8. 弃滤器，细胞悬液300g室温离心10min；完全弃去上清

9. 用PEB缓冲液重悬细胞至合适体积用于后续的流式细胞染色