第三代免疫分析技术：报设备计划的三大注意事项

免疫分析有这么多设备，如何选择？选一个传统的？还是选一个前沿的？会不会是第一个吃螃蟹的？以下是报设备计划的三大注意事项。

No.1 核心分析原理优与ELISA技术，实验步骤接近传统ELISA技术，易于使用

以MSD（Meso Scale Discovery）的超敏多因子电化学发光分析仪：SQ120 & S600为例，由于其基于石墨微孔板的电化学发光免疫分析技术，继承了传统ELISA的优点，又改变了传统ELISA技术的三大短板：

（A）微孔板的底部材料。

钩状效应是ELISA方法中因被测样本中抗原或抗体浓度过高而出现假阴性的带现象(zone phenomenon)。我们知道抗原抗体反应除需有适合的电解质、PH和温度外，抗原抗体比例适合也很重要。

血清免疫学中的“带现象”，早在 1929年分别由 Shibley和Hedberger提出。此后研究者甚多，其机理尚未完全清楚，但认为主要原因是抗原抗体问比例不适而发生的抑制反应，因抗体过剩而发生抑制反应称前带现象；因抗原过剩而发生抑制反应称“后带现象”，统称“带现象”。以沉淀反应为例，学者们根据试验得到关系图1。在免疫学试验中，恒定量的抗体(或抗原)中加入递增量的抗原(或抗体)形成抗原抗体复合物(沉淀)，曲线高峰部分是抗原抗体比例最适范围，称等价带。在等价带前因抗原量少，抗体相对含量高为抗体过剩带，等价带后抗体相对含量低为抗原过剩带。无论是抗原过剩还是抗体过剩，都会使反应信号弱化。当抗原抗体极度过剩时，则无沉淀形成，反应呈阴性。使反应信号(Ic量)～(抗原抗体相对浓度)呈一条钩状曲线。1977年 Green等根据曲线形状，提出“钩状效应”(Hook effect)这个名称，它概括了前带和后带现象，在命名上较为确切。

ELISA微孔板的孔底为塑料底，包被载量局限，钩状效应(hook effect)明显。检测范围在2个数量级别，灵敏度在pg/ml-ng/ml级别。下图为ELISA示意图，检测指标Human TNF-a，ELISA检测范围15-1000 pg/ml 。

MSD电化学发光技术（也称ECL ELISA）微孔板的孔底为石墨底，包被载量提升10-50倍，检测范围比ELISA延长了10-100倍，检测范围高达5-6个数量级，灵敏度可提升10-1000倍（fg/ml-pg/ml级别）。同一种细胞因子，MSD提供了多种不同检测范围的试剂盒，以适应特定项目需求。下图为MSD示意图，检测指标Human TNF-a。MSD U-plex试剂盒检测范围0.54-3700 pg/ml，MSD S-plex试剂盒检测范围0.0068-42 pg/ml 。

（B）检测信号/标记材料。

ELISA常用辣根过氧化物酶HRP（分子量：40,000 Da），HRP空间位阻大，HRP标记效率不稳定，HRP非特异反应信号来源广泛。溶血标本，红细胞溶解破裂，释放出血红素形成，而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP（辣根过氧化酶），有国内报道酶免HBsAg试剂检测溶血标本时可造成假阳性。

MSD采用SULFO-TAG（三联吡啶钌），是一种发光底物。分子量为1000 Da，是HRP的1/40，空间位阻小，易于标记抗体。SULFO-TAG（三联吡啶钌）是在阳极表面失去电子，发生氧化，在三丙胺阳离子自由基的催化及三角形脉冲电压激发下，可产生高效、稳定的连续发光；可以循环反应，使发光得以增强、稳定，检测步骤简化。

No. 2 一台免疫分析设备需具备多种应用功能，并有大量高端文献支持。

MSD（Meso Scale Discovery）的超敏多因子电化学发光分析仪：SQ120 & S600，采用了基于石墨微孔板的电化学发光免疫分析技术（也被称为ECL ELISA），从源头上改变了传统ELISA原理的多个短板，从在ELISA终端应用方法变得非常丰富。

（2）生物药生物分析基础设备：9大功能，1个机器

（3）ELISA转MSD电化学发光（方法学开发入门）

（4）多位点磷酸化试剂盒：将WB降低至4.5小时，灵敏度提升10倍

（5）抗体GMP检测必备：MSD Cell Based Assay开发套装，CD20类抗体结合活性

（6）提早20年血液鉴定老年痴呆？JAMA重磅文章应用MSD电化学发光

（7）What makes the MSD better than typical ELISA Assay?

（8）新冠重磅：世界卫生组织（WHO）顾问评价MSD多重IgG检测试剂盒，IgG功能性检测

（9）2018年，超敏电化学发光MSD在《自然》《柳叶刀》发文情况

（10）MSD S600的384孔检测系列（应用5）：BI在线讲座介绍ELISA-MSD全自动平台建设方案

（11）MSD免疫分析聚焦“易，大，多，微，高，严”

No. 3 中国一流实验室要求使用，甚至在招聘中明确要求掌握该技术
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