MSD爆款试剂盒V-plex文献汇:双特异抗体的T细胞活化

T细胞介导的方法在骨髓瘤治疗中已显示出前景。然而，目前可作为靶点的特异性骨髓瘤抗原数量有限，多发性骨髓瘤（MM）仍是一种不治之症。G蛋白偶联受体5类成员D（GPRC5D）在MM和阴燃MM患者血浆细胞中表达。在这里，证明了GPRC5D蛋白存在于MM细胞的表面，并描述了JNJ-64407564，一种GPRC5DxCD3双特异性抗体，它将CD3+T细胞招募到GPRC5D+MM细胞并诱导GPRC5D+细胞的杀伤。在体外，JNJ-64407564诱导GPRC5D+细胞的特异性细胞毒性，同时伴随T细胞活化，并在体外杀死MM患者样本中的血浆细胞。在GPRC5D+MM小鼠模型中，JNJ-64407564可招募T细胞并诱导肿瘤消退，与肿瘤部位T细胞浸润相吻合。这种抗体也能诱导患者骨髓原代MM细胞的细胞毒性，而骨髓是本病的自然部位。GPRC5D是一种很有前途的MM免疫治疗表面抗原，JNJ-64407564目前正在复发或难治性MM患者的1期临床试验中进行评估（nct033999）。

GPRC5DxCD3抗体可在体外诱导T细胞介导的GPRC5D+细胞毒性

研制了人源化IgG4双特异性抗体JNJ-64407564，该抗体以IgG4-PAA为支架，可与靶细胞GPRC5D和T细胞CD3ε链结合。为了评估抗体活性，在JNJ-64407564存在下，将具有不同GPRC5D表达水平的GPRC5D+MM细胞系（MM.1R[1271受体/细胞]；OPM-2[746受体/细胞]和H929[191受体/细胞]）与纯化的健康人T细胞以5:1 E/T比率孵育。对所有细胞系均有促进作用，但dau-ec0.5nM-0.5nM-50细胞有效浓度为0.5nM，而dAU-ec0.5nM-50细胞有效浓度为0.05nM。正如预期的那样，阴性对照双特异性抗体（GPRC5DxNull和NullxCD3）没有表现出任何细胞毒性。数据点沿着生成的拟合曲线紧密排列，供者之间的变异性最小（n=6）。在相同的实验中，JNJ-64407564始终诱导T细胞活化，如T细胞上CD25表达的增加（EC50=0.01至0.11 nM）所证明，而当T细胞与JNJ-64407564和GPRC5D-细胞一起培养时，或当对照抗体与T细胞和GPRC5D+细胞一起培养时，未观察到明显的活化。为了进一步表征观察到的T细胞活化，根据上述体外H929分析测定分析上清中分泌的细胞因子水平。JNJ-64407564治疗导致IFN-γ、IL-2、IL-8、IL-10和TNF-α的分泌，与T细胞活化一致（下图）。

JNJ-64407564 specifically kills GPRC5D+ target cells with concomitant T-cell activation. (C) Supernatants from the H929 assays were evaluated for cytokine levels using the Meso Scale Discovery human proinflammatory panel 1 kit (K15049D; Meso Scale Discovery). Average EC50 values from 6 different donor T cells are listed in the table.

IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13和IL-12p70在T细胞活化时显示出可检测的但最小的诱导（数据未显示）。此外，当测量T细胞增殖时，观察到使用Ki67染色的流式细胞术测量的剂量依赖性反应。

试剂盒使用：Production of interferon γ (IFN-γ), IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, and tumor necrosis factor α (TNF-α) was assayed using the Meso Scale Discovery （MSD） human proinflammatory panel 1 kitas per the instructions (K15049D; Meso Scale Discovery).