蛋白分析实验技术
1、MSD超敏电化学发光平台
针对550位北美和欧洲的顶级生物医药研究人员的报告中显示,基于电化学发光技术的MSD(MesoScale Discovery)是最受 欢迎的5大免疫分析品牌之一。可将Western Blot从16小时缩短至4.5小时。
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电化学发光是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,是电化学和化学发光两个过程的完美结合。MSD电化学发光检测技术使用SULFO-TAGTM标记物,在MULTI-ARRAY和MULTI-SPORT微孔板的电极表面通电后,电化学作用激发SULFO-TAGTM标记物发出强光。
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型号 | MSD SQ120 |
工作原理
|
超敏电化学发光 |
功能配置 | -25°C低温CCD Camera,可兼容6种plate,单次可读5块板, 每小时可以读取40块板。。 |
类型 | 1-spot, 96-well SECTOR; 4-spot, 96-well SECTOR; 7-spot, 96-well SECTOR; 10-spot, 96-well SECTOR; small-spot, 96-well SECTOR; 1-spot, 96-well QUICKPLEX; |
检测灵敏度 | 0.05 pg/mL |
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1)更高灵敏度与更宽的线性范围
MSD灵敏度可达0.05pg/ml,有效线性范围达6log(从亚皮克级到几万皮克),能同时兼顾高低丰度蛋白的检测。传统 ELISA常规线性范围在10pg/ml-1000pg/ml,采用Ultra-sensitivity试剂盒则为0.5-10pg/ml。(对比详情见下图)
MSD Assay
Disease Human
Sensitive ELISA
Normal Human
Typical ELISA
Disease Human
Sensitive ELISA
Normal Human
Typical ELISA
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2)样本兼容度高,基质效应小
MSD平台由于其独特的电化学发光原理,可将许多非特异信号予以排除,受样本性质的影响更小(如粘稠样本,悬浊颗粒样 本等),因此对于各类生物学样本的兼容度高。目前测定样本包括但不限于:血清,血浆,培养上清,细胞/组织裂解液,脑脊 液,尿液,眼睛房水,灌洗液等生物学样本。
3)节省样本用量,可实现多重检测
传统ELISA每孔所需样本量一般为50-100uloMSD通过点阵技术,在96孔石墨电极板里,可实现每孔25卩L样本,10个指标的 检测,为珍稀样本的研究提供了更多的数据。
4)实验流程简便、快速、多元化
MSD提供了更为便捷快速的实验流程,通常只需4-5小时,即可完成整个检测流程,简要步骤如下:
4.1V-PLEX
卵育样品2h
孵育检测抗体2h
抗体检测
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4.2 U-PLEX
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5)信号稳定且不受显色顺序影响
MSD由于基于电化学发光原理,信号分子SULFO-TAG需在电激发的情况下才能产生信号,因此整个实验流程无需避光,每 孔激发与信号采集时长统一,避免了像ELISA底物与终止液加入顺序先后所导致的数据差异,不受操作人员技术水平差异 的影响。请见下图电化学发光平台示意图(见后页)
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- 1.炎症、趋化因子筛选
- 2.免疫状态评价-Thl/Th2/Thl7
- 3.肿瘤微环境-肿瘤免疫
- 4.细胞因子风暴、脓毒血症等
- 5.病原微生物感染、天然免疫等
- 1.MAPK, NF-kappaB信号通路
- 2.mTOR、JNK、EGFR、STAT等磷酸酶位点研究, 涉及十几个信号转导通路
- 3.磷酸化受体络氨酸位点激酶研究
- 4.细胞应激和凋亡研究
- 5.人IPSC/ES多能性研究
- 1.免疫原性、药物高通量筛选
- 2.中和实验、抗体亲和力检测
- 3.生物工艺、宿主残留
- 4.药物代谢和药物动力
- 5.药物毒理、安全性评价
- 1.神经退行性疾病(AB38、AB40、AB42、
- 2.2a-SynucleinxTau...)
- 3.肿瘤、癌症(AFP、FGF、CEA、CRP...)
- 4.心血管疾病(cTnk FABPs Myl3...)
- 5.生殖、内分泌、代谢紊乱(FSHsGLP-K Insulin、 Adiponectin...)
- 6.骨代谢(ALPxOsteopontirixOsteocalcin...)
- 7.缺氧(HIF-ld、EPO、VEGF...)
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MSD开发试验
项目
- 条件摸索
- 完成标准曲线摸索和样本初步检测
- 完成方法学检测
包含内容
- A、捕获抗体、检测抗体、标准品、二抗条件摸索
- B、标准曲线摸索和初步样本测试
- C、方法学验证(整体重复3次)