Fixable Viability Dye 死活细胞鉴定染料
时间:2021-05-18 14:56:19 浏览次数:3920
一、为什么要进行细胞细胞鉴定?
▶ 死细胞带来非特异性染色
▶ 会导致背景增高,影响检测数据的灵敏度
▶ 死细胞染色影响正常的结果比例
二、Fixable Viability Dye(FVS)与传统染料PI/7-AAD有和区别?
1. PI、7-AAD的问题
▶ PI、7-AAD的染色通常是放在其他抗体孵育完成后进行,不能洗涤即要上机检测;
▶ 对于胞内抗体的染色,由于经过了固定步骤,经过PI或7-AAD染色后所有的细胞都是阳性,所以它们只适合胞膜染色的死活细胞鉴定。
▶ 而PI、7-AAD与常用染色通道PE PerCP是同一检测通道,二者只能选择其一使用。PI和7AAD发射谱很很宽,488 nm蓝色激光发射基本上580BP和690BP都被占用,这样大大减小了多色试验中的配色和调补偿的难度
2. Fixable Viability Dye的优点是:
▶ 固定、破膜以及洗涤步骤不影响Fixable Viability Dye的染色
▶ Fixable Viability Dye的光谱多样,适合各种染色组合的搭配。FVS系列有多种,分别对应不同的激光器,发射出不同波长的光,而且发射谱很集中。
三、Fixable Viability Dye使用原理
FVS为氨基反应性染料,与细胞表面或者内部的蛋白不可逆的结合。FVS是染细胞表面或膜内侧的游离胺,活细胞弱阳,死细胞强阳。正是由于和PI 、7-AAD原理不同,所以对于一些需要固定破膜步骤的试验FVS一样适用,如果固定破膜后细胞发生死亡,该染料还是能反应细胞的死活情况,这点是核酸染料所不能替代的。
实验原理图:
四、Fixable Viability Dye使用步骤
实验室前准备:收到货物低温保存,避免反复冻融。 使用前将FVS死活染料的冻干粉产品,加入260ul新鲜配制的二甲基亚砜(DMSO,SigmaD2650),恢复至室温。重复涡旋保证充分溶解。溶解后可以进行分装,在溶解后90天内使用完毕。
保存温度:冻干粉-80度保存,DMSO溶解后-20度保存。
1、 将Fixable Viability Dye先平衡至室温;
2、 用不含叠氮钠、血清及蛋白的PBS将细胞洗两遍;
3、 用1ml PBS(不含叠氮钠、血清及蛋白)重悬细胞,至1-10^6/ml的浓度。
4、 加入1ul Fixable Viability Dye,立即涡旋混匀;
5、 2-8℃ 避光孵育30分钟;
6、 用PBS或者流式染色缓冲液洗1~2遍;
7、 固定、破膜进行胞内染色
实验结果图:
四、订购产品清单:
货号 |
产品名称 |
规格 |
BD Horizon Fixable Viability Stain 450 |
0.1mg |
|
BD Horizon Fixable Viability Stain 510 |
0.1mg |
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BD Horizon Fixable Viability Stain 520 |
0.15mg |
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BD Horizon Fixable Viability Stain 660 |
0.1mg |
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FVS450 |
FVS510 |
FVS520 |
FVS660 |
激发波长 |
404nm |
408nm |
498nm |
649nm |
发射波长 |
448nm |
512nm |
521nm |
660nm |
激光器 |
405nm紫色激光 |
488nm蓝色激光 |
488nm蓝色激光 |
633nm红色激光 |
替代 荧光染料 |
V450, BV421 Pacific Blue™ |
V500, BV510 |
FITC, Alexa Fluor 488 |
APC, Alexa Fluor 647 |
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