外泌体，带来革命变革的小不点（三）

外泌体天然存在于体液中，在包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁等体液中广泛分布，而且，所有培养的细胞类型均可分泌外泌体；但是，想要研究这个分布广泛的小不点可不是一件容易的事情，其中，最为困难的就是从体液或者细胞培养基中分离出高纯度的外泌体。今天，小优专题给您带来的就是外泌体研究的最关键步骤——外泌体捕获与分离这一部分的技术讲解与解决方案。

外泌体分离的传统方法为差速超速离心法和密度梯度超速离心法等，差速超速离心法是目前外泌体提取最常用的方法。简单来说是将细胞培养液或体液等样本依次在300 g、2 000 g、10 000 g离心去除细胞碎片和大分子蛋白质，最后100 000 g离心得到外泌体。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，质量不好，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。另一种常用的外泌体分离方法为密度梯度离心法，将样本和梯度材料一起超速离心，样品中的不同组分沉降到各自的等密度区，分为连续和不连续梯度离心法。用于密度梯度离心法的介质要求对细胞无毒，在高浓度时粘度不高且易将pH调至中性。实验中常用蔗糖密度梯度离心法，在离心法的基础上，预先将两种浓度蔗糖溶液(如2.5 M 和0.25 M)配成连续梯度体系置于超速离心管中，样本铺在蔗糖溶液上，100 000 g离心16 h，外泌体会沉降到等密度区(1.10~1.18 g/ml)。用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，产量少。而且，这两种传统方法都需要用到超速离心机，设备昂贵，耗时长，一次最多只能做6个样品，效率低，并且需要大量的样品才能得到足够多的外泌体。

接下来小优就为您带来优宁维为您提供的高效外泌体捕获与分离技术，帮您远离枯燥乏味的超速离心，快速高效制备高质量的外泌体。话不多说，亮技术，上产品：

首先闪亮登场的是简单的一步法分离外泌体，实验原理如下图：

一步法分离外泌体原理示意图

该技术的优势有节省时间，小体积样本适用（可从100 μl血浆中分离出足量外泌体），无需超速离心和其他预富集方式，试剂方便储存于运输（4℃保存）等。相关产品见下表：

产品编号	产品名称	产品规格	样本类型
M1001	ExoPure™ Reagent (Overall Exosome Isolation)	5/10/20 T	biological fluids
M1002		25/50 T	cell media
M1003		25/50 T	urine

除了一步法分离外泌体的技术外，小优还为您提供免疫捕获法，包括免疫微球产品与免疫预制板产品。首先我们来看免疫微球捕获分离外泌体的技术原理：

免疫微球分离外泌体原理图

免疫微球捕获分离外泌体的优势包括实验操作步骤简单快速，无需超速离心等其他预富集操作，支持小样本量，可以筛选特异细胞分泌的外泌体等。产品列表如下：

产品编号	产品名称	产品规格	珠子规格
NBP2-49826； M1030	Overall Exosome Isolation (Cell Media)	10/20 Reactions	0.4 μm
NBP2-49828； M1031	Overall Exosome Isolation (Cell Media)	10/20 Reactions	1 μm
NBP2-49829； M1032	Tumor-Derived Exosome Isolation (Biofluids)	10/20 Reactions	0.4 μm
NBP2-49830； M1033	Tumor-Derived Exosome Isolation (Biofluids)	10/20 Reactions	1 μm
NBP2-49831； M1034	Overall Exosome Isolation (Mouse biofluids)	10/20 Reactions	0.4 μm
NBP2-49832； M1035	Overall Exosome Isolation (Mouse biofluids)	10/20 Reactions	1 μm
NBP2-49833； M1036	Overall Exosome Isolation (Mouse cell media)	10/20 Reactions	0.4 μm
NBP2-49834； M1037	Overall Exosome Isolation (Mouse cell media)	10/20 Reactions	1 μm
NBP2-49835； M1038	Overall Exosome Isolation (Biofluids)	10/20 Reactions	0.4 μm
NBP2-49836； M1039	Overall Exosome Isolation (Biofluids)	10/20 Reactions	1 μm

免疫预制板捕获分离外泌体的原理如下图所示：

免疫预制板分离外泌体原理图

其优势包括可以长保存（保质期2年），支持小样本量（可低至每孔100 μl样品量），无需超速离心等其他预富集操作，可分泌特异细胞分泌的外泌体，可在板上对捕获的外泌体进行核酸提取操作等。相关产品如下：

产品编号	产品名称	产品规格	显色方法
NBP2-49802； M1004-100-T	Overall Exosome Isolation from Biofluids	100 Assays	Colorimetric
NBP2-49803； M1005-100-W		100 Assays	Luminometric
NBP2-49804； M1006-100-B		100 Assays	Fluorometric
NBP2-49805； M1007-100-T	Overall Exosome Isolation from Serum	100 Assays	Colorimetric
NBP2-49806； M1008-100-W		100 Assays	Luminometric
NBP2-49807； M1009-100-B		100 Assays	Fluorometric
NBP2-49808； M1010-100-T； M1013-100-T	Overall Exosome Isolation from Saliva	100 Assays	Colorimetric
NBP2-49809； M1011-100-W； M1014-100-W		100 Assays	Luminometric
NBP2-49810； M1012-100-B； M1015-100-B		100 Assays	Fluorometric
NBP2-49811	Overall Exosome Isolation from Cell Media	100 Assays	Colorimetric
NBP2-49812		100 Assays	Luminometric
NBP2-49813		100 Assays	Fluorometric
NBP2-49814； M1016-100-T	Tumor-derived Exosome Isolation from Plasma	100 Assays	Colorimetric
NBP2-49815； M1017-100-W		100 Assays	Luminometric
NBP2-49816； M1018-100-B		100 Assays	Fluorometric
NBP2-49800； M1019-100-T	Neural-derived Exosome Isolation from Plasma	100 Assays	Colorimetric
NBP2-49817； M1020-100-W		100 Assays	Luminometric
NBP2-49818； M1021-100-B		100 Assays	Fluorometric
NBP2-49819； M1022-100-T	Glial-derived Exosome Isolation from Plasma	100 Assays	Colorimetric
NBP2-49820； M1023-100-W		100 Assays	Luminometric
NBP2-49821； M1024-100-B		100 Assays	Fluorometric
NBP2-49822； M1025-100-T	Monocytes/Platelet-derived Exosome Isolation from Plasma	100 Assays	Colorimetric
NBP2-49823； M1026-100-W		100 Assays	Luminometric
NBP2-49824； M1027-100-B		100 Assays	Fluorometric

如果您需要从较大量的样本中提取外泌体，小优还为您提供方便大样本量的超滤离心解决方案，其技术原理如下图：

超滤方法纯化分离外泌体示意图

相关产品如下：

产品编号	产品名称	处理体积
SLGP033RB	Millex针头式过滤器（33 mm，0.22 μm）	~ 100 mL
SCGPU11RE，SCGPT10RE	Stericup过滤杯（0.22 μm）	100 mL - 1 L
UFC500396，UFC200324 UFC800396，UFC900396	Amicon Ultra超滤管-3 kDa	0.5 mL，2 mL， 4 mL，15 mL
UFC510096，UFC210024 UFC810096，UFC910096	Amicon Ultra超滤管-100 kDa	0.5 mL，2 mL， 4 mL，15 mL
UFC700308	Centricon Plus 70超滤管-3 kDa	70 mL
UFC710008	Centricon Plus 70超滤管-100 kDa	70 mL
UFSC05001，UFSC20001， UFSC40001	Amicon搅拌式超滤杯（配各种孔径超滤膜片）	50 mL，200 mL，400 mL
UFC30GV0S	Ultrafree微滤离心管（0.22 µm）	0.5 mL，2 mL

同时，小优还有外泌体提取的试剂盒及层析柱产品，包括可以分离含有特异性表面抗原外泌体的试剂盒，相关产品如下：

产品编号	产品名称	产品规格
K1237	Exosome Isolation Kit (Cell Media)	2, 10 T
K1238	Exosome Isolation Kit (Serum, Plasma)	2, 10 T
K1239	Exosome Isolation Kit (Stem Cell Media)	2, 10 T
K1240	Exosome Isolation Kit (Urine)	2, 10 T
K1241	Exosome Isolation Kit (Bio Fluids)	2, 10 T
76064	exoEasy Maxi Kit	20 assays

产品编号	产品名称	产品规格
MEX-SA	ExoCap™ Streptavidin Kit	1 Kit
EX-EPC-SP	ExoCap™ EpCAM Kit for Serum Plasma	20 tests
EX-COM-SP	ExoCap™ Composite Kit for Serum Plasma	20 tests
EX-C9-SP	ExoCap™ CD9 Kit for Serum Plasma	20 tests
EX-C63-SP	ExoCap™ CD63 Kit for Serum Plasma	20 tests
EX-C81-SP	ExoCap™ CD81 Kit for Serum Plasma	20 tests

产品编号	产品名称	产品规格
130-110-912	Exosome Isolation Kit Pan, human	EA
130-110-913	Exosome Isolation Kit CD9, human	EA
130-110-914	Exosome Isolation Kit CD81, human	EA
130-110-918	Exosome Isolation Kit CD63, human	EA
130-111-572	Exosome Starting Kit Pan, human	EA
130-111-573	Exosome Starting Kit CD9, human	EA
130-111-575	Exosome Starting Kit CD81, human	EA
130-111-576	Exosome Starting Kit CD63, human	EA

产品编号	产品名称	产品规格
K1246	ExoPureTM Chromatography Columns	5/10 columns
K1247	ExoPureTM Mini Chromatography Columns	10/20 columns

相信这么多优秀的捕获分离外泌体的产品，肯定有适合您的。同时，优宁维还为您提供优质专业的实验室技术服务，助力科研，让您外泌体研究无忧。

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外泌体，带来革命变革的小不点（三）— 外泌体捕获分离