手把手课程之WB优化，本期品牌：R&D Systems

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Western Blot 现在仍然是检测和分离蛋白最常用的一种实验方法，但是要想得到较好的结果并不容易，只有找到合适的实验条件并进行优化，才能以更少的时间得到更多的结果，达到事半功倍的效果！

下面是R&D Systems 品牌为您推荐的免疫印迹优化步骤和实验涉及参考数据：

一抗浓度对实验结果的影响

抗体：Human/Mouse/Rat RSK1 Antibody (Catalog # AF992)

样本：人HeLa细胞  Fig.1

A：5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

B：5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：0.2 mg/mL，溶于5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

Fig.1

脱脂奶粉及NaCl 浓度对实验结果的影响

抗体：Human PTP1B Antibody (Catalog # AF1366)

蛋白分离：人 HeLa细胞 (Lane 1)，MCF-7 (Lane 2)和TF-1 (Lane 3)  Fig.2

A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于2% 脱脂奶粉和0.15 M NaCl

B. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于5% 脱脂奶粉和0.15 M NaCl

C. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于5% 脱脂奶粉和0.5 M NaCl

Fig.2

一抗浓度、一抗溶液中脱脂奶粉含量及印迹缓冲液中NaCl 浓度对实验结果的影响

抗体：Human PTP1B Antibody (Catalog # AF1366)

2% 脱脂奶粉溶液中一抗浓度对实验结果的影响 Fig.3：

A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于2% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

B. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：0.3 mg/mL，溶于2% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

C. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：0.1 mg/mL，溶于2% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

 Fig.3

5% 脱脂奶粉溶液中一抗浓度对实验结果的影响 Fig.4：

A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

B. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：0.3 mg/mL，溶于5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

C. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：0.1 mg/mL，溶于5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

Fig.4

印迹缓冲液中NaCl 浓度对实验结果的影响 Fig.5：

A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于5% 脱脂奶粉，0.15 M NaCl

B. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于5% 脱脂奶粉，0. 5 M NaCl

Fig.5

印迹溶液中NaCl 浓度对实验结果的影响

抗体：Human/Mouse/Rat RSK1 Antibody (Catalog# AF992)

样本：人HeLa细胞 Fig.6

A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于5% 脱脂奶粉和0.15 M NaCl

B. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于5% 脱脂奶粉和0.5 M NaCl

Fig.6

我们为您推荐实验设计数据参考：

裂解缓冲液: 

蛋白酶磷酸酶抑制剂：

电泳凝胶的制备：

内参对照：

转膜：

显色：

选择R&D Systems 抗体的四大理由：
     1、Purification-采用抗原亲和纯化的方式对抗体进行纯化，纯化后的抗体具有更好的特异性；

     2、Antigens-使用重组蛋白作为制备抗体的免疫原，大大提高了抗体对抗原的特异性识别能力;

     3、Specificity-批次间稳定性的严格控制，有效保证了R&D Systems目录抗体在识别抗原时的特异性；

     4、Source-多种宿主来源，以及多种单抗或多抗的选择，为客户提供了更丰富、更贴心的选择。

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